۴-۱-۴-۲-۳-مسکن به ازاء هزار نفر جمعیت ۱۴۳
۴-۱-۵- روند تحولات قیمت مسکن ۱۴۳
۴-۱-۶- نقش دولت و بخش خصوصی در تامین مسکن ۱۴۵
۴-۱-۶-۱-سرمایه‌گذاری دولت در تامین مسکن ۱۴۵
۴-۱-۶-۲-سرمایه‌گذاری بخش خصوصی در واحدهای مسکونی مناطق شهری کشور به تفکیک ساختمان های شروع شده، نیمه تمام و تکمیل شده ۱۴۸
۴-۲- تجزیه‌وتحلیل شاخص‌های بررسی شده در طول برنامه سوم وچهارم ۱۵۱
۴-۳- جمع‌بندی ۱۷۵
فصل پنجم: پاسخ به سوالات و نتیجه‌گیری ۱۷۷
مقدمه ۱۷۸
۵-۱- پاسخ به سوالات ۱۸۰
۵-۲- نتیجه‌گیری ۱۸۷
منابع فارسی ۱۹۲
منابع انگلیسی ۱۹۵
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول شماره ۱: مسکن مقرون‌به‌صرفه در چین ۵۹
جدول شماره ۲: خلاصهای از برنامههای تامین مسکن کمدرآمدها در کشورهای مختلف ۹۴
جدول شماره ۳: روند تحولات شاخص بهای اقلام کلیدی در بخش مسکن(برنامه سوم) ۱۰۴
جدول شماره ۴:تولید در بخش مسکن طی برنامه سوم ۱۰۶
جدول شماره ۵: سهم ساختمان‌های سه طبقه و بیشتر در ساخت‌و سازهای مناطق شهری طی دوره برنامه سوم ۱۰۶
جدول شماره ۶: روند تحولات شاخص بهای اقلام کلیدی در بخش مسکن(برنامه چهارم) ۱۱۱
جدول شماره ۷:مشخصات کلی حجم ساخت‌و ساز در مسکن مهر(هزارواحد) ۱۱۳
جدول شماره ۸: برآورد میزان نقدینگی خانوارهای شهری جهت خرید مسکن در سال ۱۳۸۸ میلیون ریال- درصد ۱۱۵
جدول شماره ۹: تغییرات جمعیت و خانوار کل کشور در نقاط شهری و روستایی در سال‌های ۹۰-۱۳۳۵ ۱۲۲
جدول شماره ۱۰: مقایسه تغییرات نرخ رشد جمعیت و خانوار کل کشور در نقاط شهری و روستایی در سال‌های۹۰-۱۳۳۵ ۱۲۳
جدول شماره ۱۱: پروانه های ساختمانی صادر شده برای احداث ساختمان مسکونی بر حسب تعداد واحد مسکونی، مساحت زمین و مساحت زیربنا در نقاط شهری(فقره- هزار مترمربع) ۱۲۴

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

جدول شماره ۱۲: روند تحولات متوسط زیربنای هر واحد مسکونی در نقاط شهری کل کشور طی سال‌های ۱۳۸۰-۱۳۹۱ ۱۲۵
جدول شماره ۱۳: پروانه های ساختمانی صادر شده در مناطق شهری برحسب شیوه ساخت در سال‌های ۱۳۸۵تا۱۳۹۰ ۱۲۶
جدول شماره ۱۴: ضریب جینی و سهم هزینه ناخالص سرانه هر دهک در سال‌های ۹۱-۱۳۸۰: کل کشور(دهک وزنی) ۱۲۸
جدول شماره ۱۵: متوسط هزینه‌های خالص سالانه یک خانوار شهری و روستایی(ریال) ۱۳۰
جدول شماره ۱۶: متوسط درآمد سالانه یک خانوار شهری و روستایی (ریال) ۱۳۱
جدول شماره ۱۷: متوسط هزینه مسکن در سبد هزینه خانوار(ریال) ۱۳۳
جدول شماره ۱۸: متوسط هزینه ناخالص سالانه مسکن یک خانوار شهری در هر یک از دهکهای هزینه سالانه(ریال) ۱۳۴
جدول شماره ۱۹: متوسط هزینه ناخالص سالانه مسکن یک خانوار روستایی در هر یک از دهکهای هزینه سالانه(ریال) ۱۳۶
جدول شماره ۲۰: تحولات شاخصهای دستیابی به مسکن، طول دوره انتظار،درآمد خانوار و قمیت مسکن در بازه زمانی۹۱-۱۳۷۹ ۱۳۹
جدول شماره ۲۱: خانوارهای شهری ساکن در کشور بر حسب نحوه تصرف مسکن ۹۰-۱۳۷۵ (درصد) ۱۴۰
جدول شماره ۲۲: روند تحولات موجودی مسکن مناطق شهری و روستایی کشور در سالهای ۱۳۶۵تا۱۳۹۰(میلیون واحد) ۱۴۱
جدول شماره ۲۳: متوسط موجودی مسکن سالانه اضافه شده مناطق شهری و روستایی کشور در سالهای۹۰-۱۳۶۵ ۱۴۱
جدول شماره ۲۴: تحولات شاخص نفر در واحد مسکونی در سالهای۹۰-۱۳۶۵ ۱۴۲
جدول شماره ۲۵: تحولات تراکم خانوار در واحد مسکونی در سالهای ۱۳۶۵ تا۱۳۹۰(میلیونواحد) ۱۴۲
جدول شماره ۲۶: واحدهای مسکونی موجود به ازای هزار نفر جمعیت در سالهای ۹۰-۱۳۶۵ ۱۴۳
جدول شماره ۲۷: روند تغییرات شاخص بهای کالاها و خدمات مصرفی و شاخص بهای مسکن ۱۴۴
جدول شماره ۲۸: متوسط نرخ رشد سالانه قیمت مسکن در سالهای ۱۳۷۹ تا ۱۳۹۱(درصد) ۱۴۵
جدول شماره ۲۹: اعتبارات عمرانی دولت در فصل مسکن(میلیون ریال) ۱۴۶
جدول شماره ۳۰: خانوارهای دریافت کننده زمین برای ساخت واحد مسکونی و مساحت اراضی واگذار شده توسط سازمان ملی زمین و مسکن ۱۴۷
جدول شماره ۳۱: احداث مسکن محرومین توسط بنیاد مسکن انقلاب اسلامی ۱۴۸
جدول شماره ۳۲: سرمایهگذاری بخش خصوصی در واحدهای مسکونی مناطق شهری کشور (میلیارد ریال) ۱۴۹
جدول شماره ۳۳: چارچوب سیاست‌گذاری در بخش مسکن در برنامه‌های توسعه سوم و چهارم ۱۸۱
فهرست نمودارها
عنوان صفحه

آب اندازی

Synersis

آلوکسان (فیبر و به عوان پری بیوتیک)

Aloxan

اینولین (فیبر و به عوان پری بیوتیک)

Inulin

لاکتولوز (فیبر و به عوان پری بیوتیک)

Lactolose

اولیگوفروکتوز (فیبر و به عوان پری بیوتیک)

Oligoferoctose

اسیدیته کل قابل تیتراسیون با سود

Total titrabl acidity

محیط کشت مخصوص رشد لاکتوباسیلوس کازئی

MRS-vancomycine agar

فصل اول
مقدمه و بیان مسئله
۱ – ۱ : مقدمه
جنس پرنگوس^۱ (جاشیر) متعلق به خانواده آمبلیفرا^۲ و شامل حدود ۳۰ گونه است (Evans, 1989). 15 گونه از جنس پرنگوس (جاشیر) در ایران یافت می شود که ۵ گونه بومی است (مظفریان،۱۹۹۶). برخی از گونه های پرنگوس (جاشیر) در طب سنتی بعنوان عوامل ملین، بادشکن (زرگری، ۱۹۸۸)، نیروبخش، ضد نفخ، دافع کرم روده، ضد قارچ و ضد باکتری استفاده می شود (زرگری، ۱۳۶۷؛ Baser et al., 2000 ؛ A. Ulubelen, G. Topcu, N. Tan, S. Olcal, S. Tamer, 1995). ترکیبات جنس پرنگوس (جاشیر) شامل تنوعی از کومارین ها^۳، آلکالوئید ها^۴، فلاوونوئید^۵، ترپنوئید^۶ و مشتقات گاما پایرون^۷ است (Chapman & Hall, London, 1998؛ Shikishima et al., 2001; Sajjadi, Zeinvand, Shokoohinia, 2009; Razavi et al., 2008).
جاشیر عضوی از جنس پرنگوس متعلق به تیره چتریان و با نام علمی پرنگوس فرولاسیا^۸ می باشد که گیاهی پایا و بلند است و عمدتاً به عنوان علوفه ای غنی در تغذیه دام استفاده می شود و فراوانترین گونه پرنگوس در ایران است. از طرف دیگر اسانس های جاشیر از متابولیت ثانویه گیاهی بوده که به طور وسیعی در صنایع غذایی، دارویی و بهداشتی و به عنوان ترکیباتی با خاصیت ضد میکروبی مورد استفاده قرار می گیرد (امیری، ۱۳۸۶). همچنین از این گیاه به منظور درمان اختلالات گوارشی در طب سنتی ایران استفاده شده است و در بین عامه مردم به عنوان گیاهی با اثر ضد درد و ضد التهاب شناخته می شود (امام قریشی، تقوی، جاویدنیا، ۱۳۹۱). درصد قابل توجهی از اسانس این گیاه را ترکیبات مونو ترپن های هیدروکربنی^۹ تشکیل میدهد و تنها سزکویی ترپن^۱۰ شناسایی شده در این اسانس بتاکاریوفیلن^۱۱ (۱/۳%) است. از میان ۱۰ ترکیب شناسایی شده در اسانس آلفاپینن^۱۲ (۶/۳۶%)، بتاپینن^۱۳(۹/۳۱%) و بتافلاندرن^۱۴(۷/۱۱%) ترکیبات اصلی محسوب می شوند (امیری، ۱۳۸۶). از نظر اجزائ تغدیه ای مشخص شده است که میزان پروتئین خام در مراحل رشد رویشی، گلدهی و بذردهی به ترتیب ۲/۱۵، ۴/۹ و۲/۷ درصد و الیاف خام آن نیز به ترتیب ۸/۱۵، ۹/۲۷ و ۲/۲۹ بود. متوسط عناصر پر مصرف کلسیم، فسفر، سدیم و منیزیوم به ترتیب۷/۱ ،۱۷/۰ ، ۰۲/۰ و ۳۱/۰ درصد و متوسط عناصر کم مصرف مس و روی به ترتیب ۸ و ۶/۳۲ میلی گرم در کیلوگرم اندازه گیری شد (عباسی، معروفی، ۱۳۸۷).
بعضی از کومارین ها جدا شده از جاشیر اثر ضد ویروس ایدز از خود نشان دادند (SHikishima, 2001). پرنگوس فرولاسیا لیندل^۱۵ گیاهی است که در مدیترانه و نواحی خاور میانه یافت می شود، به عنوان علوفه ای با انرژی بالا مورد(Martins, Ramos et al. 2013) توجه قرار گرفت. بخش های هوایی پرنگوس فرولاسیا (جاشیر) معمولا بعنوان غذای حیوان در ایران و برخی کشورها استفاده می شود (Coskun, Gulsen, Umucallar, 2004). گزارشاتی مبنی بر فعالیت های آنتی اکسیدانی و ضد باکتریایی پرنگوس فرولاسیا وجود دارد (Coruh, Sagdicoglu Celep, Ozgokce, 2007).
ماست^۱۶ از تخمیر اسیدی شیر حرارت دیده توسط فعالیت باکتری های مولد اسید لاکتیک به ویژه استرپتوکوکوس سالیواریوس تحت گونه ترموفیلوس^۱۷ و لاکتوباسیلوس دلبروکی تحت گونه بولگاریکوس^۱۸به میزان معین و درجه حرارت و زمان مشخص به دست می آید (گیتی کریم، ۱۳۸۸) و از پر مصرف‌ترین فرآورده‌های تخمیری شیر است، که به دلیل ارزش تغذیه‌ای بالا تأثیر مثبتی در سلامتی انسان و اهمیت ویژه‌ای در رژیم غذایی افراد دارد (آمارنامه کشاورزی، امور دام و آبزیان،۱۳۸۰ ). خصوصیات ماست نظیر اسیدیته، میزان اسید چرب آزاد، ترکیبات ایجاد کننده عطر و طعم (دی استیل^۱۹، استالدهید^۲۰ و استوئین^۲۱) و همچنین خصوصیات حسی و ارزش تغذیه‌ای فاکتورهای مهمی در ارزیابی محصول می‌باشند. این فاکتور‌ها تحت تأثیر عواملی از قبیل ترکیب شیمیایی شیر، شرایط فرایند، افزودنیها و فعالیت باکتریهای آغازگر^۲۲در حین تخمیر قرار می‌گیرد Tammim et al., 1999؛ Bonzer et al., 2002).
پروبیوتیک^۲۳ ها، میکروارگانیسم های غیر بیماری زایی میباشد که اگر به تعداد کافی و به صورت زنده مورد استفاده قرار گیرند، از راه ایجاد تعادل میکروبی در روده، اثرات مفید و سلامتی بخشی بر میزبان خود اعمال می نمایند، به همین دلیل جز غذاهای فراسودمند^۲۴ محسوب می شوند.
باکتری های مولد اسید لاکتیک، به ویژه لاکتوباسیلوس ها^۲۵ و بیفیدوباکتریوم ها^۲۶، به طور عادی جزیی از اکوسیستم دستگاه گوارش هستند و پروبیوتیک محسوب میشوند ( Homayouni Rad, 2008؛ FAO/WHO, 2001).
به نظر می رسد محصولات لبنی حاملان خوبی برای تحویل پروبیوتیک ها به انسان باشند (Champagne and Gardner, 2005) که از جمله می توان به ماست اشاره کرد.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

دو گروه عمده از میکروارگانیسم های پروبیوتیکی، لاکتوباسیلوس ها (Lactobacillus spp) و بیفیدوباکتریو م ها (Bifidobactrium spp) هستند.
مهم ترین گونه های لاکتوباسیلوس عبارتند از:
ل. اسیدوفیلوس (L.acidophilus)، ل. سلوبیوز (L. cellobiose) ، ل. کازئی (L. casei) ، ل. کوروانتوس (L. curvatus) ، ل. دلبروکی زیرْگونه بولگاریکوس ،(L. delbrueckii, SS. bulgaricus) ، ل. فرمنتوم (L. fermentum)، ل. برویس (L. brevis) ، ل. رئوتری (L. reuteri)، ل. رامنوسوس (L. rhamnosus) و ل. پلنتاروم .(Lplantarum)
بیفیدوباکتریوم لانگوم (Bifidobacteriumlongum ) و بیفیدوباکتریوم بروه (Bifidobacterium breve) مهم ترین گونه های بیفیدوباکتریوم هستند که به عنوان پروبیوتیک مورد استفاده قرار می گیرند (Kaur , Kuhad , Garg , Chopra, 2008). از جمله فواید پروبیوتیک ها، کمک به درمان عدم تحمل لاکتوز، اسهال، یبوست، آلرژی ها، بیماریهای التهابی روده، سندرم روده تحریک پذیر، زخم معده، تحریک سیستم ایمنی و پیشگیری از بیماریهای خودایمن، کاهش کلسترول وخاصیت ضد سرطانی آن ها میباشد (Homayouni Rad, 2008؛ Kaur , Kuhad , Garg , Chopra, 2009) مواد مترشحه از لاکتوباسیلوس ها عبارتند از : کاتابولیت های^۲۷ قندی مثل اسید های آلی (اسید استیک^۲۸، اسید لاکتیک^۲۹و اسید فرمیک^۳۰) ، کاتابولیت های اکسیژن دار نظیر پراکسید هیدروژن^۳۱، ترکیبات پروتئینی مانند باکتریوسین ها^۳۲ ، پپتیدهایی^۳۳ با وزن مولکولی کم، پپتیدها و پروتئین های ضد قارچی، متابولیت های ^۳۴چربی، اسید های آمینه ^۳۵ و اسید های چرب^۳۶، فنیل لاکتیک اسید^۳۷ و هیدروکسی فنیل لاکتیک اسید^۳۸و دیگر ترکیبات مانند دی استیل، آمونیاک، اتانل، دی آمین استوئین^۳۹، استالدئید، بنزوات^۴۰، لانتی بیوتیک ها^۴۱، آنتی بیوتیک ها^۴۲، رئوترین^۴۳، رئوتریساکلین^۴۴ .(Vuyst, 1995, 1996; Laws , Gu Y, Marshall, 2008)
اثرات پروبیوتیکی که به باکتریهای لاکتیک اسید و محصولات لبنی تخمیر شده از آن نسبت داده میشود نه تنها مربوط به میکروارگانیسم ها و اجزای دیواره سلولی شان مربوط میباشد بلکه از متابولیت هایی از قبیل پپتیدها و پلی ساکاریدهای^۴۵ خارج سلولی تولید شده در زمان تخمیر نیز ناشی می شود (Yamaguchi, Hearing, Itami, Yoshikawa, Katayama, 2009 و Ennahar, Deachamrs, 2000)). اثر بازدارندگی رشد توسط برخی از این مواد بر باکتری های مسموم کننده از طریق مواد غذایی و میکروارگانیسم های فاسد کننده نظیر لیستریاها (Strus , Pakosz, Goscinia, Mordarska, 2001) کلستریدیو م ها و انتروکوکوس ها (Reuter, 2001) برخی از باسیلوس ها و استافیلوکوکوس ها (Strus , Pakosz, Goscinia, Mordarska, 2001) به اثبات رسیده است . لاکتوباسیل ها با منشاء انسانی اثر آنتاگونیستی^۴۶ بر بیماریزاهای^۴۷ گوارشی – روده ای مختلف نظیر هلیکوباکتر پیلوری، کلستریدیوم دیفیسل، کمپیلو باکتر ژژونی و اشریشیاکلی دارند (Reuter, 2001). پروبیوتیک ها نه تنها به عنوان مکمل های غذایی و دارویی^۴۸ بلکه در تهیه فراورده های لبنی، آب میوه ها، شکلات ها و حتی فراورده های گوشتی نیز به کار می روند. میکروارگانیسم هایی به عنوان پروبیوتیک مورد توجه قرار می گیرند که بتوانند از معده و روده عبور کنند، در مجرای گوارشی تکثیر شوند و با تولید متابولیت های آنتاگونیستی با میکروفلور ساپروفیت^۴۹ رقابت کنند . این توانایی در بین باکتری های اسید لاکتیک مانند لاکتوباسیل ها و بیفیدوباکترها وجود دارد (Ouwehand, Tuomola, Tolkko and Salminen, 2001). اگزوپلی ساکاریدهای^۵۰ ترشح شده توسط پروبیوتیک ها دارای اثرات مثبتی همچون تحریک سیستم ایمنی^۵۱ و فعالیت ضد سرطان^۵۲ می باشند (Bujalancel, Moreno, Jimenez-Valera, Ruiz Bravo, 2007). این میکروارگانیسم ها دارای اثرات تحریک کنندگی و تقویت کنندگی بر روی سیستم ایمنی می باشند، بطور مثال در مطالعه ای که روی موشهای مبتلا به نقص ایمنی صورت گرفت نقش پروبیوتیک ها به عنوان یک عامل موثر در تعدیل سیستم ایمنی^۵۳ و بهبود پاسخ ایمنی^۵۴ نشان داده شده است (Oliveiraa, Sodinib, Remeufb and Corrieub, 2001). تعادل میکروبی دستگاه گوارش می تواند تحت تاثیر عوامل زیادی از جمله بیماری ، استرس، سن ، رژیم غذایی ، شرایط جغرافیایی و برخی عوامل دیگر برهم خورده و در نتیجه اختلالاتی را در سلامت فرد به وجود آورد. لاکتوباسیل ها و بیفیدوباکترها در حفظ این تعادل میکروبی در درجه ی اول اهمیت قرار دارند. این میکروارگانیسم ها جزو خانواد ه ی باکتری های لاکتیکی هستند که استفاده از آن ها پیشینه ی طولانی دارد؛ از این رو ایمن بودن آن ها کاملاً محرز گشته است . امروزه لاکتوباسیل ها و بیفیدوباکترها بخش اعظمی از کشت ها ی آغازگر پروبیوتیکی را تشکیل می دهد (Richardson, 1996) و به شکل گسترد ه ای از آن ها در تولید فرآورده های غذایی پروبیوتیکی استفاده می شود. این فرآورده ها اغلب از نوع لبنی هستند چرا که شیر ضمن داشتن ارزش تغذیه ای فوق العاده، ماتریکس مناسبی برای این میکروارگانیسم ها فراهم می آورد (Mital and Garg, 1992; Molder, 1990; Patel, Dove, Sannabhati, and Dave, 1991). شرایط انتخاب پروبیوتیک طبق توصیه سازمان های بهداشت و سازمان خوار و بار جهانی^۵۵ این است که پروبیوتیک ها باید قادر به اعمال اثرات مفید خود بر روی میزبان به واسطه رشد و فعالیت در بدن انسان باشند (ftp:http//ftp.fao.org/es/esn/food/probio_report_en.pdf, Accessed 27 October 2006). معیارهای اصلی در انتخاب سویه های پروبیوتیکی شامل داشتن منشاء انسانی ، مقاومت در برابر اسید و صفرای سیستم گوارش و قابلیت چسبیدن به دیوار ه ی روده و مقابله با میکروب های بیماری زای آن محیط می باشد (Bengmarks, 1995; Katherine Zeratsky, 2010; MayoClinic.com., 2010 ; David Dugdale, 2010; Duffy, Sporn, Hibberd, et al., 2010; Possemiers, Marzorati, Verstraete, Van de Wiele. 2010). عوامل پروبیوتیک دارای ویژگی هایی هستند که آنها را از سایر عوامل درمانی متمایز می سازد. مهمترین این ویژگی ها شامل : زنده بودن این عوامل و تاثیر آنها بر محیط زنده، آسانی تهیه و تکثیر آنها، استعمال آسان آنها، قابلیت زیست و بقاء این عوامل در شرایط داخلی محیط زنده و عدم پاسخ ایمنی بدن به آنها، قدرت تکثیر در حد بالا در بدن میزبان، بی خطر بودن استعمال آنها و نداشتن عوارض سوء جانبی ( مانند آن چیزی که در مورد استعمال آنتی بیوتیک ها دیده می شود ) و ارزانی تهیه این عوامل می باشد (Ejtahed, Mohtadi Nia, Homayouni Rad, Niafar, Asghari Jafarabadi, Mofid 2011; Pashapour, Hosyniyan Zakaria, 2004; Boehm, Stahl, 2003).
به منظور بهره مندی مصرف کننده از فواید پروبیوتیک ها باید روزانه (۱۰^۹-۱۰^۸ سلول بیفیدوباکتر در روز و ۲۰ گرم شیر اسیدوفیلوس حاوی ۲۰۰ میلیون عدد لاکتوباسیلوس در هر میلی لیتر) یا بیش از ۱۰۰ گرم ماست حاوی حداقل cfu/ml 10⁶ باکتری پروبیوتیک مصرف شود. همچنین نیمه عمر پروبیوتیک ها کوتاه می باشد لذا طی مصرف آنها حتما به تاریخ انقضای فرآورده توجه شود (خسروی دارائی و کوشکی، ۱۳۸۷).
لاکتوباسیلوس کازئی باکتری گرم مثبت^۵۶ ، مزوفیل^۵۷، میله ای شکل^۵۸، هموفرمنتاتیو اجباری^۵۹، میکروآئروفیل^۶۰، کاتالاز منفی^۶۱، بدون اسپور^۶۲ و ظرفیت بالایی برای تولید اسید دارد (مرتضوی و سهراب وندی، ۱۳۸۵؛ Iyer&Hittinahalli, 2008). این باکتری قابلیت بقائ بالایی در فرآورده های تخمیری شیری دارد (Rasdhari et al., 2008). اسید لاکتیک تولید شده توسط لاکتوباسیلوس کازئی از نوع L⁺ است. این باکتری به ونکومایسین مقاوم است و نسبت به لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس مقاومت کمتر نسبت به شیره معده دارد (مرتضوی و سهراب وندی، ۱۳۸۵). فعالیت این باکتری بیش از بقیه لاکتوباسیلوس های یافت شده در فرآورده های تخمیری شیر بوده و قادر به تخمیر طیف وسیعی از کربوهیدرات های موجود در محیط است. بصورت منفرد یا در ترکیب با پروبیوتیک های دیگر جهت دستیابی به ویژگی های مطلوب تغذیه ای، ارگانولپتیکی به ماست افزوده می شود (Vahcic & Hruskar, 2000). از ویژگی های لاکتوباسیلوس کازئی کمک به تقویت سیستم ایمنی ، بهبود کارکرد سالم سلولی و کمک به رشد باکتری های مفید در دستگاه روده ای می باشد (Aryana and McGrew, 2007). برخی مطالعات نشان داده است که لاکتوباسیلوس کازئی توانایی کاهش فعالیت آنزیم های مضر مانند بتاگلوکورونیداز^۶۳، نیتروردوکتاز^۶۴ و گلیکوکولیک اسید هیدرولاز^۶۵ را دارا می باشد (Guerin-Danan, 1998; ؛ Aryana and McGrew, 2007). همچنین از آن برای تولید صنعتی اسید لاکتیک از آب پنیر از طریق روش راکد سازی سلول ها بر پایه هایی همچون آگار^۶۶، پلی آکریل آمید^۶۷، ژل پکتات کلسیم^۶۸، آلژینات^۶۹ و دانک های کیتوزان اصلاح شده شیمیایی^۷۰ استفاده شده است (مرتضوی و سهراب وندی، ۱۳۸۵). تحقیقات عده ای از دانشمندان خاصیت آنتی اکسیدانی لاکتوباسیلوس کازئی را اثبات کردند (Saide & Gilliland, 2005 ).
پری بیوتیک ها^۷۱ اجزای غذایی غیر قابل هضمی^۷۲هستند که با تحریک انتخابی رشد یا فعالیت یک یا تعداد محدودی از باکتری ها درروده، اثرات مفیدی را در میزبان به جای می گذارند (ftp:http//ftp.fao.org/es/esn/food/probio_report_en.pdf, Accessed 27 October 2006). کربوهیدرا ت های غیر قابل هضم^۷۳ و .. در دسته پری بیوتیک ها قرار می گیرند (Bujalancel, Moreno, Jimenez-Valera, Ruiz Bravo, 2007). پری بیوتیک ها به عنوان منابع غذایی کربوهیدرات غیر قابل هضم انتخابی هستند که تکثیر بیفیدوباکتر ها و لاکتوباسیلوس ها را ارتقاء می دهند (Gibson & Roberfroid,1995).
وجود نارسایی هایی حین عملیات تولید، نگهداری و توزیع فراورده ها و هم چنین عبور از شرایط نامطلوب دستگاه گوارش (محیط اسیدی معده و وجود نمک های صفراوی) از جمله مواردی هستند که باکتری های پروبیوتیک باید در مقابل آن حفظ شوند .لازمه بروز آثار مثبت پروبیوتیک ها، بقای آنها تا رسیدن به محل فعالیت شان ( روده بزرگ) است. بنابراین باید روش هایی برای حفظ پروبیوتیک ها اتخاذ گردد که افزودن زیر مغذی ها و پری بیوتیک ها از جمله آنهاست (Mital and Garg, 1992; Molder, 1990; Patel, Dove, Sannabhati, and Dave, 1991).
گیاه جاشیر درمناطق کوهستانی سپیدان در استان فارس می روید و در بهار چیده می شود. با توجه به خواص تغذیه ای جاشیر و دارا بودن فیبر و احتمال دارا بودن نقش پری بیوتیک ممکن است گیاه جاشیر بتواند در ماست پروبیوتیک سبب بقاء بیشتر میکروارگانیسم های پروبیوتیک شود اگر چه اطلاعات خاصی در این زمینه در دسترس نمی باشد. مصرف فراورده های سین بیوتیک^۷۴ (حضور همزمان پروبیوتیک و پری بیوتیک) اثرات سودمند بیشتری بر سلامت مصرف کننده دارد، به علاوه اینکه در فراورده های سین بیوتیک بقای باکتری های پروبیوتیک در مدت نگهداری فراورده و نیزعبور آنها از دستگاه گوارش بیشتر می شود. لازم به ذکر است که در نقاط مختلف محل رویش گیاه جاشیر در ایران از آن در تولید ماست – جاشیر بصورت وسیع استفاده می شود .
۱-۲ : هدف از انجام تحقیق
کاملا روشن است که محصولات پروبیوتیک و سین بیوتیک نقش مهمی در سلامتی انسان دارند. همچنین سابقه تاریخی و تحقیقات امروزی خواص سلامت بخش جاشیر را به اثبات رسانده اند. از طرف دیگر توجه به توسعه تولید غذاهای بومی ایران نیز ضرورتی اجتناب ناپذیری می باشد. لذا با توجه به اینکه در استان فارس بصورت بومی ماست جاشیر تولید و مصرف می شود و نیز از اثرات افزودن جاشیر بر خصوصیات فیزیکوشیمیایی و حسی ماست پروبیوتیک حاوی لاکتوباسیلوس کازئی و اثر آن بر بقاء میکروب های پروبیوتیک اطلاعاتی در دسترس نیست لذا هدف از انجام این مطالعه بررسی اثر افزودن جاشیر با درصد های مختلف بر خصوصیات فیزیکوشیمیایی و حسی و میکروبی ماست پروبیوتیک بود.
۱-۳ : اهداف وفرضیات

سن سرپرست خانوار از دو طریق می‌تواند بر سطح زندگی خانوار تأثیرگذار باشد. نخست آنکه بر طبق فرضیه دوران زندگی مودیگلیانی افراد در سنین جوانی و میانسالی از بازدهی و کارایی بالاتری برخوردارند و دوم آنکه در سنین میانسالی، افراد با افزایش مهارت و تخصص، می‌توانند به مشاغل و پست‌های بالاتری دسترسی پیدا کنند (محمدزاده و همکاران، ۱۳۹۱).
در خصوص بعد خانوار، بکر^[۲۴] (۱۹۹۲) نشان داده است که هزینه نگهداری فرزندان در کشورهای درحال­توسعه به واسطه وجود عواملی چون درآمد انتظاری حاصل از مشارکت فرزندان در کسب درآمد خانوار و انتظار حمایت فرزندان از والدین در دوران کهولت و کسالت، بطور قابل توجهی نسبت به کشورهای توسعه‌یافته پائین‌تر است به این ترتیب می‌توان انتظار داشت که بعد خانوارها در این کشورها افزایش یابد (عرب‌مازار و حسینی‌نژاد، ۱۳۸۳).
۲-۲-۵- شاخص‌های وسعت فقر
تعداد افراد فقیر و خط فقر به تنهایی نمی‌تواند الگوی فقر را توصیف کند زیرا به‌ ازای خط فقر و تعداد فقیران مشابه در دو یا چند جامعه، شدت فقر در این جوامع می‌تواند متفاوت باشد. لذا برای درک اندازه فقر در هر جامعه شاخص‌هایی داریم که شدت فقر را نشان دهند. میزان نابرابری درآمد در بین افراد فقیر، متوسط درآمد افراد فقیر، اندازه خط فقر، تعداد کل فقیران و تعداد کل افراد جامعه از جمله مؤلفه‌هایی هستند که بر میزان شدت فقر تأثیر دارند و تفاوت هر یک از آنها موجب تفاوت در اندازه شدت فقر می‌شود. در این قسمت به برخی از این شاخص‌ها اشاره می‌شود.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

• • شاخص نسبت افراد فقیر (نسبت سرشمار)^[۲۵]

ساده‌ترین، ابتدایی‌ترین و رایج‌ترین شاخص فقر تا سال ۱۹۷۰ شاخص نسبت سرشمار یا شاخص نسبت افراد فقیر بوده است. این شاخص عبارت است از نسبت تعداد افراد (خانوار) فقیر ( زیر خط فقر) به کل افراد (خانوار) در جامعه یعنی:
(۲-۱)
که در آن تعداد افراد (خانوار) فقیر و تعداد کل افراد (خانوار) جامعه است.
شاخص نسبت سرشمار می‌تواند به صورت زیر نیز نوشته شود:
(۲-۲)
که در آن تابع شاخصی است که اگر فرد فقیر باشد مقدار یک و در غیر این صورت مقدار صفر را اختیار می‌کند. بنابراین اگر مخارج کمتر از خط فقر باشد برابر یک خواهد بود و شخص فقیر محسوب می‌شود (بانک جهانی، ۲۰۰۵).

• • شاخص شکاف فقر

علت استفاده از این شاخص این است که این شاخص بر فاصله کلی فقرا نسبت به خط فقر مبتنی است که نشان‌دهنده عمق فقر است. به عبارتی، این شاخص میانگین شکاف فقر در جامعه است که در آن شکاف فقر برای افراد غیرفقیر صفر محسوب می‌گردد. با بهره گرفتن از تابع شاخص می‌توان نوشت:
(۲-۳)
که در آن شکاف فقر فرد ام و مخارج فرد ام می‌باشد. بنابراین شاخص شکاف فقر می‌تواند به صورت زیر تعریف شود:
(۲-۴)
این شاخص ارائه دهنده وسعت فقر است ولی نابرابری درآمد بین افراد فقیر را نادیده می‌گیرد (بانک جهانی، ۲۰۰۵).
این شاخص می تواند به صورت زیر بیان شود:
(۲-۵)
که در آن به عنوان مجموع شکاف فقر بوده و به صورت زیر تعریف می‌شود:
(۲-۶)

• • شاخص شدت فقر^[۲۶] (توان دوم شکاف فقر)

این شاخص نه تنها فاصله فقرا تا خط فقر (شکاف فقر) را در نظر می‌گیرد، بلکه نابرابری در میان فقرا را نیز محاسبه می‌کند. یعنی ضریب بالاتری به خانوارهای دورتر از خط فقر اختصاص می‌دهد. همانند شکاف فقر، استفاده از این شاخص برای برخی شاخص‌های غیرپولی با محدودیت روبرو می‌باشد. این شاخص می‌تواند به صورت زیر نوشته شود (بانک جهانی، ۲۰۰۵).
(۲-۷)

• • شاخص کاکوانی^[۲۷]

شاخص کاکوانی به شکل
(۲-۸)
ارائه می‌شود که در آن میانگین مخارج افراد فقیر و میانگین مخارج کل افراد جامعه می‌باشد.
این شاخص بیانگر میزان سهولت (یا سختی) از بین بردن فقرا بوده و نشان می‌دهد چند درصد از درآمد افراد غیرفقیر باید به افراد فقیر انتقال یابد تا درآمد افراد فقیر جامعه به سطح درآمد حداقل معاش (خط فقر) رسیده و فقر از بین برود (محمدی و همکاران، ۱۳۸۶).

• • شاخص فقر سن^[۲۸]

سن^[۲۹] (۱۹۷۶)، شاخص فقری ارائه داد که محرومیت نسبی افراد فقیر را در مقابل سایر افراد جامعه در نظر می‌گیرد. این شاخص به صورت زیر تعریف می‌شود.
(۲-۹)
که در آن شاخص نسبت سرشمار، میانگین درآمد (مخارج) افراد فقیر، ضریب جینی ما بین افراد فقیر و خط فقر می‌باشد.
از ویژگی‌های شاخص فقر سن آن است که اندازه آن بین صفر (در حالتی که فرد فقیر در جامعه وجود نداشته باشد) و یک (در حالتی که درآمد کلیه افراد جامعه مساوی صفر باشد) تغییر می‌کند.
همچنین شاخص سن می‌تواند به صورت میانگین معیارهای نسبت سرشمار و شکاف فقر و با وزن ضرایب جینی خانوارهای فقیر به صورت زیر نوشته شود:
(۲-۱۰)
ازبرگ و زو^[۳۰] در سال ۲۰۰۲ نشان دادند که شاخص سن می‌تواند به صورت زیر نیز نوشته شود:
(۲-۱۱)
که در آن ضریب جینی نسبت شکاف فقر (تنها) برای افراد فقیر^[۳۱] و شاخص شکاف فقر که تنها برای افراد فقیر محاسبه می‌شود (بانک جهانی، ۲۰۰۵).
برای محاسبه ضریب جینی در حالتی که داده‌ها به صورت خام و دهک‌بندی نشده در دسترس باشند در صورتی که نقطه‌ای روی محور ها و نقطه‌ای روی محور ها باشد، ضریب جینی به صورت زیر قابل محاسبه می‌باشد.

از جمله آثار موجود قدما در باب موضوع شمایل:

1. 1. کتاب الشمایل المحمّدیه، تألیف امام ترمذی محمّد بن عیسی(۲۱۰ ـ ۲۷۹ق).

از جمله آثار موجود قدما در باب موضوع دلایل:
دلایل النّبوه، تألیف ابوبکر جعفر بن محمّد المستفاض الفیریابی( ـ ۳۱۰ق).
الصفه­النّبی، تألیف ابوعلی محمّد بن هارون الانصاری( ـ۳۵۳ق).
از معاصران ابوسعد نیز کسانی تألیفاتی در باب دلایل النّبوه داشته اند از جمله:
محدّث متصّوف ابونعیم احمد بن عبدالله اصفهانی(۳۳۶ـ۴۳۰ق) که چند بار تجدید چاپ شده­است.
ابوالعباس جعفر بن محمّد مستغفری(م۴۳۲ق).
واعظی نسفی که نسخه­ای خطی از کتابش موجود است.
ابوذر عبد بن احمد هروی(۳۵۵ـ۴۳۴ق).
حافظ ابوبکر احمد بن حسین بیهقی(۳۸۴-۴۵۸ق) که صاحب السنن است و دلایل النّبوهاو را جامع­ترین و معتبرترین شمرده­اند.
در همین دوره، یکی دو کتاب در باب دلایل النّبوه نوشته شده که علاوه بر نقل اخبار و آثار دلایل عقلی نیز دارد از جمله:
تثبیت دلایل النّبوه، تألیف قاضی عبدالجبّار معتزلی(م ۴۱۵ق).
اعلام­النّبوه، تألیف ابوالحسن علی بن محمّد المارودی(م۴۵۰ق) که چاپی بازاری و غیرعلمی از آن موجود است.^[۵۶]
شرف النّبی ابوسعد گویا در اصل چندین جلد بوده که از اصل مفصّل آن چیزی بر جای نمانده، بلکه نسخه‌های مختصر آن در دسترس می­باشد که کم و بیش شبیه یکدیگرند مگر این­که در شماره­ ابواب نسخه­های مختلف اختلافی وجوددارد. قدیمی­ترین نسخه شرف النّبی نسخه­ برلین است، و در این نسخه به مختصر بودن آن اشاره شده است: «آخر المختصر من کتاب شرف النّبی صلی الله علیه و آله الطیبین الطاهرین الاخیار». اما مشخص نیست مؤلف خلاصه کرده یا فردی دیگر. و اگر فرد دیگری خلاصه کرده باشد نباید به اواخر نیمه­ی سده پنجم قمری برسد، زیرا نسخه­ برلین در جمادی الاولی۴۴۷ق نوشته شده است. اما ترجمه­ی فارسی راوندی که در سده ششم قمری صورت گرفته مختصرتراز نسخه­های عربی است که اساس نوشتار حاضر همین کتاب است، و شاید راوندی گاهی ترجمه­ی روایاتی را حذف کرده و باب‌هایی را کوتاه گردانیده، و شاید نسخه­ مختصر دیگری به عربی وجود داشته که اساس کار ترجمه­ی راوندی بوده که احتمال اخیر بعید به نظر می­رسد.^[۵۷]
مؤلف در آغاز هر باب اسنادهای خود را ذکر می­ کند، اما پس از روایت­های مستند ابتدای هر باب، بیشتر روایات بی سند است. در برخی روایت­ها تاریخ سماع ذکر شده و اما آخرین سماع او از ابوعمر بستی است که در سال۳۷۶ق رخ داده است.(نسخه­ برلین ق ۲۲۵ب).
تاریخ تألیف کتاب مشخص نیست، اما به خاطر آن­که ابومحمّد عبدالله بن سعید شّنتجالی(م۴۳۶ق) و ابو عمرواحمد بن محمّد قرطبی(م۴۳۰ق) در زمان اقامتشان در مکّه در دهه­ ۹۰ سده چهارم قمری اجازه­ی روایت کتاب شرف النّبی را از ابوسعد گرفته­اند، بنابراین تألیف کتاب باید پیش از دهه­ی۹۰ و پس از ۳۷۶ق باشد، زمانی که ابوسعد از ابوعمر بستی سماع حدیث داشته است و اگر دعای مغفرتی که به دنبال اسم ابوالحسن ماسرجسی(م۳۸۴ق)آمده(نسخه­ برلین ق۲۳۷آ) نوشته­ی خود مؤلف باشد نه راوی و نویسنده، می­توان احتمال داد که تألیف کتاب پس از سال ۳۸۴ق و شاید بین سال­های (۳۸۵- ۳۹۰ق)رخ داده است.^[۵۸]

شرف النّبی هر چند از منابع درجه اوّل سیره نیست و از نظر محتوا درباره روایت­های تاریخی، اهمیّت کمی دارد و در سطح متوسطی از کتاب­های شمائل و دلائل است، و به کتاب دلائل النبوه بیهقی نمی­رسد، اما در سراسر جهان اسلام معروف بوده و مطالعه سیره پیامبرصلی الله علیه و آله بدون بهره گیری از آن کامل نخواهد بود. حسن ترتیبی که در باب­ها و مستندات وجود داشته، سبب می­شد که از سوی مردم مورد پذیرش واقع شود و واعظان و قصه پردازان از آن کتاب استفاده میکردند.^[۵۹]
راویانی که ابوسعد در شرف النّبی روایتی از آن­ها نقل کرده است به شرح ذیل است:

1. 1. ابوالفتح ابراهیم بن علی بن ابراهیم(۲۰۲آ).

1. 1. ابواسحاق ابراهیم بن محمّد الدینوری در مکّه(۴۷آ).

1. 1. ابواسحاق ابراهیم بن محمّد بن یحیی المزکّی(۶۴ب،۷۶آ).

1. 1. ابوحامد احمد بن محمّد بن حمدان المراری(۲۶۰آ).

۵٫ابوطاهر احمد بن محمّد بن اسماعیل السفیانی الهروی(۱۵۰آ،۲۷۹آ).

1. 1. ابوبکر احمد بن محمّد بن یحیی المتکّلم(۶۴آ،۱۵۷آ).

1. 1. ابوبکر احمد بن یعقوب بن عبد الجبّار القرشی الجرجانی در نیشابور(۱۹۱ب).

1. 1. اسحاق بن زروان بن قهزاد الفقیه در مکّه(۱۷۰آ).

1. 1. ابوسهل بشر بن احمد بن بشر بن محمود بن اشرس الاسفراینی التمیمی(ترجمه­ی فارسی، ص ۲۱۰).

1. 1. ابوالوفاء تمّام بن عبد الله الصقلی مولی جعفر بن الفضل بن الفرات الوزیر در مصر(۱۷ب).

۱۱٫ابوالفضل جعفر بن الفضل الوزیر در مکّه (۲۳ب،۲۰۷آ،۲۴۸آ).

1. 1. ابوعلی حامد بن محمّد بن عبدالله بن معاذ الهروی(۲۰۲ب،۲۴۹آ).

1. 1. ابوالولید حسّان بن محمّد بن احمد بن هارون بن حسان در(۳۴۷ق)(۲۲۲آ).

1. 1. ابوعبدالله الحسین بن احمد بن محمّد الصفار الهروی در نیشابور(۳۵۹ق)(۶۲آ).

1. 1. ابواحمد الحسین بن علی بن محمّد بن یحیی النیسابوری التمیمی^[۶۰](۲۹۴ب، و قراءه علیه فی سنه(۳۶۰ق)،(۹۵آ، باب ۲۷و۲۸ ترجمه­ی فارسی نسخه­ پاریس ۱۰۹ب،۱۱۰ب).

1. 1. عبدالله بن حامد(۱۶۹ب).

1. 1. ابوسعید عبدالله بن محمّد بن عبد الوهاب الصوفی الرازی(۱۷۱ب،۲۵۰آ).

1. 1. ابومحمّد عبدالله بن محمّد بن علی بن زیاد الدقّاق العدل(۵۳ب).

1. 1. الشریف ابومحمّد عبدالله بن یحیی بن طاهر الحسینی در مدینه(۲۹ب).

1. 1. ابوذر عمّار بن محمّد بن مخلّد بن جبیر البغدادی در مدینه(۴ب).

1. 1. ابوعثمان بن ابراهیم نیشابوری،پدر ابوسعد(باب ۳۱،ترجمه­ی فارسی نسخه­ پاریس،۱۱۶ب).

1. ابوالحسین محمّد بن احمد بن جمیع الغسّانی در صیدا(۱۳۱ب).

۱-۲-۶ Real- Time PCR
۱ -۲-۶-۱ تعریف و مفهوم Real- Time PCR
همانطور که از معنی واژه بر می‏آید Real-time PCR مشاهده لحظه به لحظه یک فرایند می‏باشد. مشکلات و نواقص عدیده موجود در end Point PCR همراه با نیاز به یک روش تعیین کمی دقیق زمینه گشایش عرصه‏ای نوین در تکنیک PCR گردید. Real Time PCR یا qRT- PCR روش تغییر یافته‏ای است که برای ارزیابی کمیت نسبی یک رونوشت خاص در تعدادی نمونه و ارزیابی سطح تجمع آن رونوشت پس از تیمارهای مختلف یا در بافت‏های مختلف استفاده نمود. qRT- PCR یک روش بر مبنای PCR است که برای تکثیر و اندازه‏گیری میزان ملکول هدف به صورت همزمان به کار می‏رود، علت نامگذاری این روش Real- Time PCR اندازه‏گیری DNA تکثیر شده بعد از تجمع آن در واکنش، در زمان واقعی است.

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

در این روش از دو طریق میزان ملکول هدف اندازه‏گیری می‏شود:
استفاده از کاوشگرهای الیگونوکلئوتیدی تغییریافته DNA
هیدرولیز کاوشگرها (کاوشگر TaqMan)
هیبریداسیون کاوشگرها (light Cycler)
۱-۲-۶-۲ استفاده از رنگ آمیزی فلورسنت DNA مانند SYBR Green
این رنگ‏آمیزی برای تعیین تنها میزان DNA به کار رفته و با تمام محصولات دو رشته‏ای PCR، اختصاصی و غیر اختصاصی (دایمر پرایمرها) اتصال می‏یابد (گائوچون و همکاران، ۲۰۰۴).
انجام qRT- PCR با بهره گرفتن از ترموسایکلر و میزان فلورسنت با بهره گرفتن از یک دستگاه ردیاب محقق می‏شود. SYBR Green تنها زمانی که به DNA دو رشته‏ای متصل می‏شود، از خود نور فلورسنت ساطع می‏نماید. برای تعیین دقت آزمایش، از یک ژن خانه‏دار (مرجع) برای کنترل مثبت و آب به عنوان کنترل منفی استفاده می‏شود. بدین ترتیب تغییر در کمیت و کیفیت RNA قابل تشخیص می‏شود (نولان و همکاران، ۲۰۰۶).
۱-۲-۶-۳ مزایای روش Real- Time PCR
تکثیر در هر زمان قابل مشاهده می‏باشد. به عبارتی امکان مانیتورینگ لحظه به لحظه واکنش فراهم آمده و در هر سیکل امکان بررسی فرایند تکثیر وجود دارد.
امکان بهینه ‏سازی واکنش به طوری که مناسب‏ترین غلظت DNA و پرایمر و همچنین تعداد سیکل لازم برای تکثیر مشخص می‏شود.
امکان قطع واکنش در زمان دلخواه: از آنجائیکه روند PCR قابل مشاهده می‏باشد، در صورت عدم تکثیر و یا رفتن به فاز سکون می‏توان به واکنش خاتمه داد و از اتلاف وقت و انرژی پرهیز نمود.
انجام PCR کمی: با بهره گرفتن از روش کمی‏ کردن مطلق و کمی کردن نسبی، میزان دقیق و نسبی الگوی اولیه قابل اندازه‏گیری است.
معمولا واکنش‏ها سریع‏تر اتفاق می‏افتد و زمان کمتری لازم است.
محدوده تشخیص آن بالاتر از PCR معمولی است. حتی اختلاف کمتر از ۲ برابر را هم نشان می‏دهد.
۱-۲-۶-۴ روش بررسی کمی بیان ژن یا quantitative real-time PCR
پیدایش Real Time –PCR و Real Time Reverse Transcription PCR یا Real Time RT- PCR بطور قابل توجهی سنجش بیان ژن را متحول نموده است. Real Time –PCR تکنیک جمع‏آوری داده‏های واکنش PCR همزمان با انجام آن بوده و تکثیر و تشخیص را در یک مرحله انجام می‏دهد. این امر بوسیله انواع متنوعی از واکنش‏های شیمیایی مرتبط با نور فلورسنس انجام می‏گیرد که غلظت محصول PCR را به شدت نور فلورسنس تولیدی مرتبط می‏ نمایند (هیگوچی و همکاران، ۱۹۹۳).
فرایند شیمیایی مورد استفاده در سیستم PCR Real- Time امکان تشخیص فراورده‏های PCR را در طی فازهای ابتدایی واکنش ایجاد می‏نماید. این امر دارای مزایای زیادی در مقایسه با روش‏های PCR معمولی است. روش‏های معمولی از ژل‏های آگارز برای شناسایی محصولات PCR در فاز انتهایی یا نقطه نهایی واکنش استفاده می‏ نمایند. روش PCR Real- Time10000تا۱۰۰۰۰۰ بارحساس‏تر از روش‏های RNase protection assey (وانگ، ۲۰۰۵)،۱۰۰۰ بار حساس‏تر از روش dot blot hybridization بوده و حتی قادر به تشخیص تنها یک کپی از یک نسخه‏برداری خاص هستند (جنتل و همکاران، ۲۰۰۱)؛ و دارای ضرایب انحراف کوچکتر (cv برای SYBR Green 2/14%،TaqMan 24%) در مقایسه با روش‏های نقطه پایانی مانند دانسیتومتری باشد (۹/۴۴%) و هیبریدیزاسیون پروب (۱/۴۵%) هستند. Real-Time PCR همچنین قادر است بین RNA های پیامبر (mRNAs) با توالی‏های بسیار نزدیک تفاوت قائل شود. این روش به مقادیر نمونه RNA بسیار کمتری نیاز داشته و در صورت مناسب بودن تجهیزات، مقادیرنسبتا بالایی محصول واکنش تولید می‏نماید. واکنش Real-Time PCR را می‏توان به ۴ فاز اصلی تقسیم نمود: فاز خطی زمین‏های، فاز اولیه نمایی (Exponential Phase)، فاز خطی لگاریتمی (Linear Phase) وفاز کفه (Plateau Phase) (تیچوپد و همکاران، ۲۰۰۳). این مراحل در شکل ۲-۴ نشان داده شده‏اند. طیف از خطی زمینه‏ای (معمولا ۱۵-۱۰ چرخه اول) PCR آغاز شده و انتشار فلورسنس در هر چرخه هنوز از سطح زمینه فراتر نمی‏رود. همانگونه که ذکر گردید فلورسنس پایه (Baseline floresence) در این زمان محاسبه می‏گردد. در فازنمایی اولیه، میزان فلورسنس به سطح آستانه‏ایی ا CT می‏رسد که بطورمعنی‏ داری (معمولا ۱۰ برابر انحراف استاندارد فلورسنس پایه) بالاتر از سطوح زمینه‏ای است. اصطلاح CT مربوط به کمپانی ABI بوده و این معیار نشانگر تعداد نسخه اولیه موجود در نمونه اصلی بوده و از آن برای محاسبه نتایج آزمایش استفاده می‏گردد (هاید و همکاران، ۱۹۹۶).
شکل-۴-۲ منحنی تکثیر فازهای Real –time PCR
۱-۲-۶-۵ آنالیز کمی mRNA با بهره گرفتن از Real-Time PCR
آنالیز کمی mRNA با بهره گرفتن از Real-Time PCR به وسیلهروش سایبرگرین (SYBR®Green) به طور وسیعی در مطالعات بیولوژیک کاربرد پیدا کرده است. اساس روش Real-Time نورسنجی است، بدین صورت که میزان نور فلورسنس که از هر تیوپ ساطع می‏شود، در هر سیکل توسط دستگاه خوانده می‏شود. میزان نور فلورسانت ساطع شده توسط محصولات، نمایانگر میزان نمونه اولیه خواهد بود و با میزان محصولات PCR نسبت مستقیمی دارد. اندازه‏گیری میزان محصول توالی هدف به دو روش انجام می‏پذیرد:۱(اندازه‏گیری مطلق ۲) اندازه‏گیری نسبی.
در اندازه‏گیری مطلق تعداد توالی هدف موجود در یک نمونه مشخص می‏شود که این روش نیازمند یک نمونه استاندارد است تا میزان دقیق تعداد توالی موردنظر در آن مشخص باشد که این می‏تواند پلاسمید ژن موردنظر باشد و در اندازه گیری نسبی، میزان بیان ژن موردنظر را نسبت به ژن‏های ساختاری سلول تحت عنوان ژن‏های خانه‏دار (House keeping genes) بیان می‏کنند. از جمله ژن‏های ساختاری سلول می‏توان به Ubiquitin C، β-Actin و GAPDH اشاره کرد.
فصل دوم
بررسی منابع
گونه‌های اکسیژن واکنشگر در سلول‌های گیاهی دارای منابع تولید زیادی می‌باشند. برخی از آن‌ ها در متابولیسم طبیعی سلول مانند فتوسنتز و تنفس نقش دارند. بر اساس دیدگاه‌های رایج، ROS یک محصول ثانویه اجتناب‌ناپذیر از متابولیسم هوازی است (Asada and takahashi,1987. دیگر منابع ROS متعلق به مسیرهایی هستند که در طی تنش‌های غیرزنده نظیر شوری، خشکی، سرما و… به وجود می‌آیند… گیاهان برای مقابله با تنش اکسیداتیو ایجادشده، دارای انواع سیستم دفاعی (آنزیمی و غیر آنزیمی) می‌باشند. سیستم دفاعی آنزیمی شامل سوپر اکسید دیسموتاز^[۴] (SOD)، کاتالاز^[۵] (CAT)، آسکوربات پراکسیداز^[۶] (APX) و گلوتاتیون ردوکتاز^[۷] (GR) و سیستم غیر آنزیمی شامل آسکوربات، توکوفرول، کاروتنوئیدها می‌باشند که با به دام انداختن رادیکال‌های آزاد باعث از بین بردن ویا غیرفعال شده آن‌ ها می‌شوند. (بلوخین، ۲۰۰۳)
نتایج بسیاری از تحقیقات نیز نشان می‌دهد که فعالیت این آنزیم‌ها در بافت برگ ارقام حساس و محتمل به خشکی بسیار از گونه‌ها افزایش میابد (بور،۲۰۰۳: دمیرل و ترکن ۲۰۰۵) اگرچه این افزایش فعالیت آنزیم در ارقام محتمل بیشتر از ارقام حساس گزارش‌شده است (شالاتا و همکاران، ۲۰۰۱)
در بررسی که میرزایی همکاران (۲۰۱۳) روی دو گونه از Brassica napus تحت تنش خشکی انجام شد گزارش کردند که با افزایش تنش خشکی افزایش آنزیم‌های سوپر اکسید دیسموتاز، پراکسیداز، کاتالاز و آسکوربات پراکسیداز در بافت برگ و ریشه مشاهده شد؛ اما میزان فعالیت این آنزیم‌ها در گونه SLM046 بیش‌تر از گونه Hyola308 بود. هم‌چنین میزان پر اکسیداسیون لیپیدی نیز در گونه Hyola308 افزایش‌یافته بود. این نتایج نشان داد که تحمل به خشکی در گونه SLM046 بیش‌تر از گونه Hyola 308 است.
میل ترکیبی APX (با مقادیر میکرومولار) و CAT(با مقادیر میلی مولار) با پراکسیداز هیدروژن، نشان‌دهنده این است که این دو در دو کلاس متفاوت از آنزیم‌های حفظ تعادل سلولی قرار دارند. APX مسئول تعدیل میزان ROS برای سیگنالینگ و CAT مسئول برطرف کردن زیادی ROS در طی تنش است. SOD تقریبا در تمام اجزای سلولی پیداشده است در کلروپلاست ها، سیتوزول، میتوکندری، آپوپلاست. مکان کاتالاز در پراکسی زوم می‌باشند. کاهش میزان فعالیت آنزیم کاتالاز در طی تنش می‌تواند به دلیل رابطه‌ی ضیعت کاتالاز با پیش ماده خود، عاملی در جهت محدود نمودن عمل محافظتی کاتالاز دخالت نموده و باعث غیرفعال شدن کاتالاز گردد.(گرامر، ۲۰۰۲)
در مطالعه‌ای که بای – لی- پینگ و همکاران در سال ۲۰۰۶ در گیاه ذرت انجام دادند مشاهده کردند که تنش خشکی منجر به کاهش فعالیت آنزیم کاتالاز شده است.
حمید نورانی آزاد در بررسی تنش کم‌آبی در گیاه آفتابگردان گزارش کردند که میزان قندهای محلول، پرولین و هم‌چنین فعالیت آنزیم‌های پراکسیداز و کاتالاز با افزایش تنش کم‌آبی افزایش یافت.
طبق مطالعه فالی و همکاران در سال ۲۰۰۷ در دو رقم کنجد، داراب ۱۴ و یکتا با کاهش میزان رطوبت خاک از ۱۰۰ درصد به ۲۵ درصد ظرفیت زراعی مزرعه میزان فعالیت آنزیم آنتی‌اکسیدانت سوپر اکسید دیسموتاز، پراکسیداز، کاتالاز پلی فنیل اکسید از را در برگ و ریشه در هر دو گونه افزایش یافت. اندازه‌گیری میزان مادون دی آلدئید در بافت برگ و ریشه نشان داد که پر اکسیداسیون لیپیدی در یکتا کمتر از داراب ۱۴ بود.
در طی مطالعه‌ای که سعید سیفی زاده و مجید رشیدی در سال ۲۰۱۰ روی عملکرد ریشه و میزان فعالیت آنزیم آنتی‌اکسیدان در چهار ژنوتیب چغندرقند انجام دادند نتایج این مطالعه نشان داد که تنش خشکی منجر به کاهش عملکرد ریشه شده است. افزایش قابل‌توجهی در فعالیت آنزیم‌های کاتالاز (CAT)، سوپر اکسید دیسموتاز (SOD) و گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) برگ‌ها مشاهده شد که تفاوت معنی‌داری بین ژنوتیپ ها ازنظر فعالیت آنزیم‌های آنتی‌اکسیدان و افزایش میزان تنش وجود داشت.
نتایج به‌دست‌آمده نشان داد که تنش خشکی منجر به تولید گونه‌های اکسیژن فعال که منجر به افزایش نفوذپذیری غشاء، مالون دی آلدئید (MDA) در گیاهان می‌شود. همچنین ارقام با سطوح بالاتری از آنتی اکسیدان­ها مقاومت بالاتر به خشکی نشان دادند.
زهره امینی در بررسی اثر تنش کم‌آبی در مراحل زایشی گیاه جو تحت تیمارهای آبی، دیم و خشکی بر فعالیت آنزیم‌های ضد اکسنده، (POX) و پراکسیداز (CAT) کاتالاز، (APX) آسکوربات پراکسیداز، (SOD) در مراحل مختلف رشد زایشی گیاه جو در شرایط مزرعه بررسی گردید. نتایج نشان داد که با افزایش سن گیاه فعالیت آنزیم سوپر اکسید دیسموتاز در هر سه تیمار و فعالیت آنزیم آسکوربات پراکسیداز در گیاهان آبی کاهش یافتند. فعالیت آنزیم کاتالاز در گیاهان آبی با پیشرفت پیری تغییر معنی‌داری نشان نداد، درصورتی‌که در تیمارهای دیم و خشکی به‌تدریج کاهش پیدا کرد. تنش کم‌آبی در تیمارهای دیم و خشکی باعث افزایش فعالیت آنزیم‌های ضد اکسنده گردید.
عبدالله محمدی و همکاران در بررسی اثر تنش خشکی بر فعالیت آنزیم‌های آنتی‌اکسیدان سه رقم نخود انجام دادند نتایج حاصل از تجزیه‌وتحلیل بیوشیمی نشان داد که فعالیت آنزیم‌های آنتی‌اکسیدان CAT، GPX و SOD در شرایط تنش با افزایش استرس افزایش یافت.
در مطالعه‌ای که علی‌رضا پور تقی و همکاران در سال ۲۰۱۱ روی آفتابگردان انجام دادن گزارش کردند که گیاهان تحت تنش نسبت به گیاهان شاهد افزایش قابل‌توجهی در فعالیت تمام آنزیم‌های آنتی‌اکسیدان در برگ مانند سوپر اکسید دیسموتاز (SOD)، گلوتاتیون پراکسیداز (GPX)، گلوتاتیون ردوکتاز (GR) و کاتالاز (CAT) را گزارش کردند.
درطی مطالعه ای که نظری و همکاران در سال ۲۰۰۸ روی بیان نسبی ژن کاتالاز و آسکوربات پراکسیداز در دو ژنوتیپ نخود دسى و کابلى تحت تنش سرما انجام دادندگزارش کردند ، میزان فعالیت آنزیم کاتالاز در رقم دسی افزایش و در رقم کابلی کاهش یافت. میزان بیان ژن آسکوربات پراکسیداز در هر دو ژنوتیپ افزایش یافت. این افزایش نشان داد که این آنزیم می تواند در تنش سرما پاسخ دهد و کمبود کاتالاز در رقم کابلی را جبران کند. پاسخ به دماى سازگارى و تنش سرما مى تواند در زمان کوتاهى پس از قرارگیرى در شرایط تنش آغاز شده و این زمان کوتاه سازگارى مى تواند برخى از گیاهان نخود را جهت تحمل به تنش هاى شدیدتر آماده سازد.
در بررسی تاثیر تنش خشکی بر بیان ژن کاتالاز و ارتباط آن با میزان پراکسید هیدروژن در گیاه گندم توسط چلینا (۲۰۰۴) انجام شد مشخص کرد که تجمع پراکسید هیدروژن با کاهش محتوای نسبی آب برگ ارتباط مستقیم داشته و با کاهش محتوای نسبی آب برگ میزان تولید پراکسید هیدروژن افزایش می یابد و با افزایش میزان پراکسید هیدروژن میزان بیان ژن کاتالاز افزایش یافته که به دنبال آن فعالیت آنزیم کاتالاز دو برابر می شود. مقررات پیچیده ای از الگوهای بیان شده از بیان ژن کاتالاز در سطح ترجمه در شرایط شب و روز وجود دارد که اجازه می دهد تا کنترل دقیق میزان پراکسید هیدروژن در برگ صورت گیرد.
مطالعه ای توسط لیکسین و همکاران در سال ۲۰۱۱ روی دو رقم مقاوم و حساس کنتاکی بلوگراس در پاسخ به تنش خشکی انجام شد هدف این مطالعه بررسی پاسخ های آنزیم آنتی اکسیدان به تنش خشکی بود.مطالعات نشان می دهد که زمانی که میزان محتوای نسبی آب به ۲۶ تا ۲۸ درصد رسید افزایش فعالیت آنزیم های سوپراکسید دیسموتاز و آسکوربات پراکسیداز در رقم حساس افزایش یافته که در مهار گونه های اکسیژن فعال از طریق تغییرات در سطح بیان ژن مشاهده شد.نتایج نشان میدهد افزایش میزان بیان در رقم حساس بیشتر از رقم مقاوم مشاهده شد و نتایج فعالیت آنزیم نشام می دهد که آنزیم های دخیل در چرخه آسکوربات پراکسیداز نقش مهمی در حفاظت آنتی اکسیدانی در برابر آسیب خشکسالی دارند.
در مطالعه ای که انسل و همکاران در سال ۲۰۱۱ دربررسی بیان ژن و فعالیت آنزیمی تحت تنش خشکی در گیاه برگ لوبیا چشم بلبلی انجام شد گزارش کردند که گونه های اکسیژن فعال در گیاهان اغلب در زمانی که گیاه در معرض تنش های غیر زنده قرار می گیرند تولید می شوند دو آنزیم پراکسیداز و گلوتاتیون ردوکتاز نقش کلیدی در مهار گونه های اکسیژن فعال دارند .آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز بر روی واکنش های اکسیداسیون و احیا نقش دارند .نتایج نشان داد که در شرایط تنش خشکی میزان بیان ژن گلوتاتیون ردوکتاز در بافت برگ افزایش یافته و میزان افزایش رابطه مستقیمی با شدت تنش دارد.
در بررسی های داکوستا و همکاران در سال ۲۰۰۷ روی تغییرات درفعالیت آنزیم آنتی اکسیدان و پراکسیداسیون لیپیدی روی سه گونه ازگیاه بنت گراس تحت تنش خشکی انجام شد مشاهدات حاکی از آن بود که در هر سه گونه کاهش عمومی در فعالیت آنزیم آنتی اکسیدانت و افزایش میزان پراکسیداسیون لیپیدی گزارش شد تنش خشکی طولانی مدت باعث آسیب اکسیداتیو در هر سه گونه شد گونه بنت گراس مخملی بیش ترین توانایی را در مهار اکسیداتیو را دارا می باشد.
در مطالعه ای که لونا و همکاران در سال ۲۰۰۶ روی تجمع پراکسید هیدروژن و فعالیت و بیان ژن کاتالاز درگندم انجام دادند به این نتیجه رسیدند که تجمع پراکسید هیدروژن ناشی از خشکسالی با کاهش محتوای آب خاک و جذب کربن دی اکسید در ارتباط است.فعالیت آنزیم کاتالاز تحت شرایط تنش خشکی شدید دوبرابرشد.
فصل سوم
مواد و روش­ها
۳-۱ تهیه مواد گیاهی