۳-۲-۱۵- فیلتراسیون سوپرناتانت
حدود ۵۰۰ سی سی سوپرناتانت حاصل شد که توسط فیلتر هولدینگ و با قطر منافذ ۴۵/۰ میکرون، فیلتراسیون انجام شد.
۳-۲-۱۶- لیوفلیزاسیون
برای حفظ پایداری و ماندگاری طولانی مدت، PRP تخلیص شده باید لیوفلیزاسیون شود. به این منظور محلول حاصل، در حجم‌های ۲ میلی لیتردر ویال‌های کوچک تقسیم شد و برای لیوفلیزاسیون به بخش تولید انستیتوپاستور فرستاده شد.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

۳-۲-۱۷- تعیین خلوص PRP تخلیص شده :
نمونه های تخلیص شده PRP برای تعیین خلوص و مقایسه با PRP استاندارد با روش طیف سنجی NMR و FTIR به بخش شیمی فیزیک دانشگاه تهران ارسال شد.درصد خلول PRP به عنوان پلی ساکارید مورد استفاده در کونژوگاسیون از اهمیت ویژه ای برخوردار است.زیرا هرچه خلوص بیشتر باشد اتصال پلی ساکارید با کریر پروتئینی بهتر انجام می گیرد.
۳-۲-۱۸- تست ریبوز
سنجش ریبوز و PRP بر اساس تست بیال انجام شد. (آشول و همکاران، ۱۹۵۷)
۳-۲-۱۸- ۱- اساس تست بیال
ریبوز جزء قندهای ۵ کربنه (پنتوز) محسوب می‌شود، در این روش می‌توان هگزوزها و پنتوزها را از هم تشخیص داد و روشی اختصاصی برای تشخیص پنتوزها می‌باشد.
پنتوزها در مجاورت اسیدکلریدریک غلیظ، آب از دست داده، فورفورال تولید می‌کنند، فورفورال با اورسینول به کمپلکس با رنگ سبز مایل به آبی تبدیل می‌شود. ( آشول و همکاران، ۱۹۵۷).
۳-۲-۱۸- ۲- معرف‌های تست بیال :
اورسینول
اسید هیدروکلریک غلیظ
فریک کلرید
اتانول
۳-۲-۱۸- ۳-محلولها و ترکیبات :
A- محلول ۱۰% فریک کلرید (Fecl3) در اسید کلریدریک (۱۲ نرمال)
B- محلول ۱۰٪ اورسینول- اتانول (۹۵ درصد)
C- محلول ۱۰٪ استوک ریبوز
۳-۲-۱۸- ۴-تهیه‌ی محلول‌های استاندارد ریبوز :
ابتدا حدود ۲۵ میلی گرم از ریبوز استاندار (مرک) را برداشته و در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل می‌کنیم (استوک۱)، سپس ۱ میلی لیتر از استوک ۱ را برداشته و حجم آن را با آب مقطر به ۱۰ میلی لیتری می‌رسانیم، سپس به میزان ۱/۰، ۲/۰، ۴/۰، ۶/۰، ۸/۰، ۱ میلی لیتر از استوک ۲ برداشته و سپس با آب مقطر حجم همه‌ی تیوپ‌ها را به ۲ میلی لیتر می‌رسانیم. سپس به همه‌ی لوله‌ها ۲ میلی لیتر از محلول gl5/0 کلریدفریک در اسید کلریدریک اضافه می‌کنیم، هم‌چنین به همه‌ی تیوپ‌ها ۲/۰ میلی لیتر از محلول grl100 اورسینول در اتانول اضافه می‌کنیم. سپس هر ۶ تیوپ را به مدت ۲۰ دقیقه در حرارت ۱۰۰ درجه سانتیگراد قرار می‌دهیم. (شکل ۳-۱۱ )بعد از ۲۰ دقیقه بلافاصله تیوپ‌ها را در آب سرد قرار می‌دهیم. بعد از آن جذب نوری هر ۶ تیوپ را در ۶۷۰ نانومتر قرائت کرده و بر اساس آن منحنی استاندارد ریبوز را رسم می‌کنیم.
ب الف
شکال۳-۶- تهیه استانداردهای ریبوز(الف -قبل از حرارت ، ب – بعد از حرارت)
۳-۲-۱۸- ۵- آماده سازی PRP تخلیص شده
حدود ۱ میلی گرم از PRP لیوفلیزه شده را برداشته و در ۴۰ میلی لیتر آب مقطر حل می‌کنیم، سپس حدود ۲/۰ میلی لیتر از این محلول را برداشته و مراحل زیر را به ترتیب عمل می‌کنیم:
۱- حجم محلول را با آب مقطر به ۲ میلی لیتر می‌رسانیم.
۲- اضافه کردن ۲ میلی لیتر از محلول gl5/0 کلریدفریک در اسید کلریدریک
۳- اضافه کردن ۲/۰ میلی لیتر از محلول grl100، اورسینول در اتانول
۴- قرار دادن تیوپ در دمای ۱۰۰ درجه سانتی گراد به مدت ۲۰ دقیقه
۵- قرار دادن تیوپ در آب سرد
۶- قرائت جذب نوری تیوب ها در ۶۷۰ نانومتر
۷- پس از رسم نمودار استاندار ریبوز، میزان ریبوز در نمونه‌ی PRP تخلیص شده بر حسب میکروگرم در میلی لیتر محاسبه شد. (آشول و همکاران، ۱۹۵۷)
۳-۳-۱- آزمون های پروتئین سنجی
چهار روش به طور روتین برای تعیین غلطت پروتئین ها در یک محلول استفاده می شود. این روش ها شامل یک روش بر اساس جذب طبیعی اشعه ماورا بنفش بوده و در سه روش دیگر، رنگ پروتئین ها تغییر پیدا می کند. این روش ها شامل، آزمون Lowry، آزمون Smith Copper/Bicinchoninic، و آزمون سنجش رنگی Bradford می باشد. با وجود این که یکی یا چند روش اشاره شده در آزمایشگاه های بیوشیمیایی مورد استفاده قرار می گیرند،اما انجام هیچ کدام از آنها به طور خاص ، به دلایل زیر به سادگی امکان پذیر نمی باشد.
در روش اول ، که جذب UV بوده، به یک پروتئین خالص که دارای ضریب (؟) بالایی است که در یک محلول عاری از مواد مداخله گروجود دارد، نیاز داریم. غلطت یکک پروتئین در یک محلول، به طور تقریبی می تواند توسط معادله های زیر برآورد شود:
A₂₈₀ = ۱ A (mL/cm mg) x [Conc.] (mg/mL) x 1 (cm)
A₂₀₅ = ۳۱ A (mL/cm mg) x [Conc.] (mg/mL) x 1 (cm)
پروتئین های مختلف دارای ضریب های شکست مختلفی در ٢٠۵ و ٢٨۵ نانومتر هستند، و غلظت های بدست آمده به این روش باید با دقت زیادی مورد بررسی قرار گیرند. پس به طور خلاصه در این آزمون، محلول پروتئینی باید فاقد مواد جاذب UV دیگر باشد، و تمامی سنجش ها باید در کووتی از جنس کوارتز انجام گیرند.
در روش های Lowry و Copper/bicinchoninic، اساس واکنش بر احیا شدن Cu2+ به Cu1+ توسط آمید ها می باشد. با این که این روش ها نسبتا دقیق هستند، اما به محلول سازی های زیادی نیاز دارند، که باید در زمان انجام آزمایش تهیه شوند. سپس، انکوباسیون باید با اختلاف دمای کم و کنترل شده ای انجام شود و فورا میزان جذب محلول های نا پایدار نیز باید خوانده شود. هر دو آزمون تحت تاثیر مواد فراوان موجود دیگر در محلول، مثل دترجنت ها، لیپید ها، بافرها و احیا کننده قرار می گیرند. هم چنین این آزمون ها نیاز به تهیه رقت های سریالی دارند، اما در هر آزمون، نیاز به رقت های مختلفی از پروتئین نمونه می باشد.
روش رنگی Bradford بر اساس تشکیل تعادل بین ٣ حالت مختلف از ربگ کوماسی بلو است.نحن شرایط سخت اسیدی، رنگ بیشترین پایداری را از خود نشان می دهد و به صورت قرمز پر رنگ
(double protononated) در می آید. پس از اتصال به پروتئین ها، بیشترین پایداری در رنگ آبی پر رنگ (unprotonated) دیده می شود.
Protein
Red <=======> Green <========> Blue <=======> Blue-Protein
(۴۷۰ nm) H⁺ (۶۵۰ nm) H⁺ (۵۹۰ nm) (590 nm)
۳-۳-۲روش برادفورد
روشی سریع، دارای مراحل محلول سازی کمتر، بدون نیاز به حرارت دادن، و دارای پاسخ رنگی مطمئن تری نسبت به روش های دیگر است. اما مانند روش های دیگر، به موادی غیرپروتئینی، مثل دترجنت ها نیز پاسخ می دهد. هم چنین، بسته به غلطت پروتئین موجود، میزان پاسخ رنگی هم تغییر پیدا می کند. به همین دلیل، انجام سنجش های پروتئینی استاندارد اهمیت دارد.
محلول های به کار رفته در روش های پروتئین سنجی قابل دسترس و آماده هستند. روش های اصلاح شده ای نیز وجود دارند که در متن به آنها اشاره شده است.
۳-۳-۳- روش پروتئین سنجی Lowry
در این روش، ٢ واکنش شیمیایی اساسی رخ می دهد: در واکنش اول، یون Cu+2 با مولکول های پروتئینی وارد واکنش می شود. در نتیجه، یک کمپلکس پروتئین- مس دو ظرفیتی را به وجود می آورد. در واکنش دوم، اسید فسفو تنگستیک و اسید فسفو مولیبدیک از محلول فولین باعث ایجاد رنگ خاصی در کمپلکس فوق می شود. در کمپلکس پروتئین- مس دو ظرفیتی، اسید آمینه تیروزین و تریپتوفان احیا می شوند و غلظت رنگ آبی محلول به میزان پروتئین موجود بستگی دارد. حساسیت این روش، بین mg/ml ٣٠٠-١ است.
محلول های مورد نیاز برای انجام روش Lowry:
محلول A: شامل ٢٠ گرم Na2CO3 و ۵ گرم تارتارات سدیم-پتاسیم است که در ١ لیتر سود M ١/٠ حل می شود.
محلول B: ۵ گرم سولفات مس آبدار ۵ ظرفیتی (CuSO4, 5 H2O)را به محلول سیترات سدیم M ٠١/٠ افزوده، و با آب مقطر به حجم ١ لیتر رسانده می شود.

۴۹۶/۱

۹۸۳/۱

۰۹۱/۲

۹۳۹/۱

سینی میانی
۳۰

۴۱۳/۱

۹۲۷/۱

۰۳۳/۲

۸۰۳/۱

سینی بالا

۶۳۲/۱

۰۳۸/۲

۱۳۸/۲

۰۳۵/۲

سینی میانی
۳۵

۶۲۴/۱

۸۱۵/۱

۰۷۵/۲

۸۴۷/۱

سینی بالا

۸۳۳/۱

۲۱۵/۲

۳۳۴/۲

۰۵۱/۲

سینی میانی

۸۱۱/۱

۱۲۸/۲

۲۲۲/۲

۸۹۹/۱

*واحدها بر حسب گرم بر لیتر (g/l)
میزان مصرف قندهای ساده نیز برای دماهای ۲۵، ۳۰ و ۳۵ درجه سانتی گراد به فاصله زمانی ۲۴ ساعت با بهره گرفتن از تست DNS و بر مبنای جذب نمونه ها در طول موج ۵۴۰ نانومتر اندازه گیری شد. بدین منظور پس از گذشت ۲۴ ساعت از رشد میکروارگانیسم و قبل از اسپری شدن آن بر روی نمونه های جامد برای شروع عملیات تخمیر، میزان قند موجود در محیط کشت اندازه گیری شد که مقدار آن ۸۸۷/۰ گرم بر لیتر بدست آمد و با توجه به میزان قندهای ساده موجود در باگاس که ۳۳۲/۰ گرم بر لیتر محاسبه شد (جدول ۴-۱)، قند اولیه برای شروع فرایند ۲۱۹/۱ گرم بر لیتر بود.در ادامه هر ۲۴ ساعت علاوه بر انجام تست پروتئین برای نمونه ها، میزان قندهای ساده نیز اندازه گیری شده و مشاهده شد که میزان قند بدست آمده در طی زمان برای هر ۳ دمای ۲۵، ۳۰ و ۳۵ درجه سانتی گراد کاهش یافت. بدین معنی که میکروارگانیسم برای تولید پروتئین قند موجود در محیط را مصرف کرد. همانطور که در نمودارهای ۴-۲ تا ۴-۴ مشخص است و با مقایسه با میزان تولید پروتئین در جدول ۴-۲ رابطه مستقیمی میان پروتئین تولید شده و میزان قند مصرف شده وجود دارد. در دمای ۳۵ درجه سانتی گراد میزان مصرف قند بیشتر بوده همانطور که میزان تولید پروتئین بیشتر بوده است. بیشتر بودن میزان قند در دماهای ۲۵ و ۳۰ درجه سانتی گراد بیانگر کم بودن مصرف قند نسبت به دمای ۳۵ درجه سانتی گراد است. این نتایج هم برای سینی بالا و هم برای سینی میانی برقرار بود. برای دمای ۳۵ درجه میزان مصرف قند برای سینی بالا و پایین با گذشت ۷۲ ساعت -که بیش ترین میزان پروتئین حاصل شد- به ترتیب ۴۵/۷۱ و ۴۴/۶۶% بدست آمد. برای دمای ۳۰ و ۲۵ نیز میزان قند مصرفی متناسب با بالاترین میزان تولید پروتئین به ترتیب ۵۹/۶۲ و ۱۶/۵۸% برای سینی بالا و ۵۲/۵۶ و ۲۴/۵۳% برای سینی میانی حاصل شد.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

شکل ۴-۲: میزان مصرف قندهای ساده توسط میکروارگانیسم در تخمیر حالت جامد در دمای °C۲۵
شکل ۴-۳: میزان مصرف قندهای ساده توسط میکروارگانیسم در تخمیر حالت جامد در دمای °C۳۰
شکل ۴-۴: میزان مصرف قندهای ساده توسط میکروارگانیسم در تخمیر حالت جامد در دمای °C۳۵
۴-۳-۴– بررسی تأثیر غنی سازی سوبسترا با منابع نیتروژنی مختلف
به منظور تأثیر غنی سازی باگاس با منابع نیتروژنی مختلفی نظیر سدیم نیترات (NaNO₃)، آمونیوم کلراید(NH₄Cl)، اوره (CH₄N₂O) و عصاره مخمر (yeast extract) با نسبت وزنی ۳% در دمای ۳۰ درجه سانتیگراد و رطوبت ۸۵% مورد استفاده قرار گرفت. سدیم نیترات یک منبع نیتروژنی معدنی است که میکروارگانیسم ها می توانند ^–NO₃ آن را به عنوان منبع نیتروژنی مصرف کنند. اوره از جمله منابع نیتروژنی آلی است که استفاده از آن به عنوان منبع نیتروژن رایج نیست که این امر به علت قیمت نسبتاً بالای اوره و ناپایداری آن در دمای بالاست. عصاره مخمر ترکیبی از اسیدهای آمینه، پپتیدها، ویتامین های محلول در آب و کربوهیدرات هاست و نیتروژن را به صورت پروتئین در اختیار میکروارگانیسم ها قرار می دهد. آمونیوم کلرید نیز منبع نیتروژن معدنی است که باعث ایجاد وضعیت قلیایی می شود ]۳۵[. از میان این منابع نیتروژنی مورد استفاده سدیم نیترات و عصاره مخمر باعث تولید پروتئین بیشتری به ترتیب به میزان ۴۶۵/۲ و ۱۷۰/۲ برای سینی بالا و ۲۲۲/۲ و ۱۰۶/۲ گرم بر لیتر برای سینی پایین شدند اما استفاده از دو منبع دیگر همانطور که در شکل ۴-۵ مشخص است تأثیری بر افزایش میزان تولید نداشتند (جداول مربوط به میزان پروتئین بدست آمده به مدت ۹۶ ساعت برای سینی بالا و میانی در پیوست ۲ ارائه گردید). علت این امر شاید به دلیل ایجاد وضعیت قلیایی در محیط توسط آمونیوم کلراید و تجزیه اوره به CO₂ و NH₃ باشد. همانطور که پیش تر گفته شد ساکرومایسیس سرویسیه در وضعیت های اسیدی می تواند رشد کند اما میکروارگانیسم ها توانایی کمی برای رشد در وضعیت های قلیایی دارند. تولید CO₂ نیز در محیط تخمیر یک عامل بازدارنده برای رشد است. Anupama و Ravindra (۲۰۰۱) نیز گزارش دادند استفاده از سدیم نیترات در مقایسه با آمونیوم نیترات و آمونیوم سولفات، برای افزایش بازده پروتئینی مناسب تر است ]۷۳[. Zadrazil و Brunnert (۱۹۸۰) بر روی تأثیرگذاری نیترات بر قابلیت هضم لیگنین در کاه^[۸۴] تحقیق کردند و گزارش دادند زمانی که از آگروسیب آئجریتا^[۸۵] به عنوان میکروارگانیسم استفاده شد با افزایش میزان آمونیوم نیترات میزان هضم لیگنین نیز افزایش یافته است ]۷۷[. Rajoka و همکارانش (۲۰۰۶) نیز گزارش دادند که اضافه کردن منابع نیتروژنی نظیر آمونیوم نیترات، سدیم نیترات، اوره، شربت ذرت خیسانده^[۸۶] و آمونیوم سولفات به کاه برنج میزان تولید پروتئین را به طور قابل ملاحظه ای بالا می برد ]۷۸[.

۱۸g/ml

۱۹g/ml

۴-۷- کونژوگاسیون PRP با اگزوتوکسینA سودوموناس آئروژینوزا :
برای تخلیص کونژوگه‌ی PRP-ETA آن را از ستون کروماتوگرافی ۴B-CL به روش ژل فیلتراسیون عبور داده و جذب نوری فرکشن‌های مختلف را در طول موج ۲۶۰ و۲۸۰ نانومتر قرائت شد. همان طور که درنمودار ۵-۶ مشاهده می‌شود، قله‌ی اول مربوط به کونژوگه‌ی PRP-ETA می‌باشد که نشان دهنده‌ی کونژوگه شدن کپسول پلی ساکاریدی PRP با کریر پروتئینی (اگزوتوکسینA) می‌باشد، قله‌ی دوم هم نشان دهنده پروتئین‌های غیر کونژوگه می‌باشد.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

نمودار ۴-۶-منحنی OD فرکشن های کونژوگه
۴-۸- بازده کونژوگاسیون PRP-ETA :
مطابق نتایج بدست آمده با برسی نسبت پروتئین کونژوگه به پروتئین اولیه در مولکول کونژوگه PRP + ETA ، بازده کونژوگاسیون۳۰ درصد محاسبه گردید
۴-۹- کنترل پیروژنی :
کونژوگه PRP-ETA تحت آزمون تب زایی در خرگوش قرار گرفت و بعد از ۲۴ ساعت هیچ گونه افزایش درجه حرارت در خرگوش ها مشاهده نشد. بنابراین نمونه های کونژوگه تهیه شده عاری از هر گونه ماده تب زا بوده و قابل تزریق بودند.
۴-۱۰- کنترل توکسیسیتی غیر عادی در موش سوری:
عدم مشاهده هرگونه عوارض جانبی نظیر کاهش وزن،التهاب موضعی و مرگ و میر در موش ها حاکی از آن بود که نمونه های کونژوگه غیر سمی و قابل تزریق بودند.
۴-۱۱- آزمون ایمونوژل دیفیوژن :
این آزمایش جهت اطمینان از اتصال آنتی ژن پلی ساکارید PRP به اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا انجام گرفت. برای این منظور ایجاد خطوط رسوبی در اثر واکنش های آنتی ژن با آنتی بادی مورد بررسی قرار گرفت و نتایج نشان داد که مولکول کونژوگه تهیه شده توانایی انجام واکنش با آنتی سرم PRP وآنتی سرم ETA را دارا بود.
شکل ۵-۵- آزمون ایمونوژل دیفیوژن.
Double immunodiffusion in 1% agarose. 1. PRP-ETA conjugate.2. PRP. 3. ETA antiserum.4. PRP-ETA antiserum (animal serum).5. PRP monospecific antiserum 6. Polysaccharide of Naiseria meningitides type A as negative control
۴-۱۲- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای بررسی وزن مولکولی :
نتایج SDS-PAGE برای بررسیPRP-ETA و ETA به ترتیب در شکل… نشان داده شده است. رنگ آمیزی ژل با بهره گرفتن از محلول کوماسی بلو ۲۵۰-G با حساسیت ۳۰-۲۰ نانوگرم با هدف تعیین حضور باند های پروتئین صورت می گیرد.
شکل ۴-۶- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای PRP-ETA و ETA
۴-۱۳- ارزیابی فعالیت باکتری کشی سرم حیوان واکسینه شده
از آنجایی که بررسی فعالیت باکتریسیدالی سرم یکی از مهمترین آزمون های ایمونولوژیکی واکسن ها است، آزمایش فوق به صورت کمی روی نمونه های سرمی حیوانات ایمن شده با واکسن کونژوگه (PRP-ETA) و PRP هموفیلوس آنفولانزای تیپb انجام گرفت. نتیجه آزمون SBA برعلیه هموفیلوس آنفولانزای تیپb سیر صعودی در القاء آنتی بادی تا روز ۴۵ را نشان می دهد .
در تزریق دوم کونژوگه (PRP-ETA) که به گروه دوم تزریق شد طبق جدول ۴-۶ نتایج نشان می دهد، توانایی القاء سنتز آنتی بادی باکتریسیدالی را در حیوان ایمن شده بعد از اولین تزریق داشته و تزریق دوم در روز ۱۵ باعث القا سطح بالایی از آنتی بادی باکتریسیدال در این گروه برعلیه هموفیلوس آنفولانزای تیپb می شود. و نتیجه آزمون SBA حاکی از سیر صعودی در عیار سنتز آنتی بادی تا روز ۴۵ را نشان می دهد و میانگین این افزایش از میانگین نتایج در گروه اول به میزان محسوسی بالاتر است.
نتایج آزمون T-test نشان دهنده اختـلاف معنـی داری در میانگیـن عیـار آنتی بادی تولید شده در دو گروه است( ۰۵/۰ P <).
جدول ۴-۵- عیـار آنتی بادی
درصد حفاظت بخشی کونژوگه (PRP-ETA) نسبت به PRP خالص
١) درصد ایمنی کونژوگه (PRP-ETA)
٢)در صد ایمنی زایی خالص PRP
جدول ۴-۶- تیتر آنتی بادی باکتری کش واکسن کونژوگه (PRP-ETA) و PRP در روزهای ۱۵،۳۰، ۴۵

تیتر باکتری کشی IgG تولید شده علیه PRP و PRP-ETA در روزهای ۱۵،۳۰، ۴۵

۱

رقت

تعداد کلنی ها

(-)

(-)

(-)

(-)

• ۸۴۳۲/۰

• (۲۰۳۹/۰)

• ۱۵۵۲/۱

• (۱۳۷۷/۰)

• ۹۶۵۸/۰

• (۱۰۶۸/۰)

• ۶۹۱۳/۰

• (۱۰۱۷/۰)

• ۳۹۲۰/۰

• (۷۳/۱۱)

• ۰۰۵۱/۰

• ۰۰۲۲/۰

MMCOA

در تحلیل جدول ۵-۳ ملاحظه می­ شود که الگوریتم پیشنهادی در فرکانس­های ۵۰۰، ۱۰۰۰، ۲۵۰۰ با تعداد قله­های مختلف آورده شده در جدول، بهتر از سایر الگوریتم­های مورد مقایسه­ عمل کرده است. ولی در فرکانس تغییرات ۱۰۰۰۰و در قله­های ۵، ۱۰، ۲۰، ۳۰ و ۱۰۰ الگوریتم پیشنهادی ضعیف عمل کرده و نتوانسته کارآیی بهتری از الگوریتم FTMPSO ارائه کند. در حالت کلی کارآیی الگوریتم­ها با پایین آمدن فرکانس تغییرات، بدتر می­ شود. دلیل این افت کیفیت، کاهش فرصت الگوریتم­ها بین دو تغییر محیطی است. در واقع در این حالت الگوریتم­ها فرصت کمتری برای یافتن موقعیت­های بهتر دارند.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

همچنین کارآیی الگوریتم­ها در محیط­هایی با تعداد قله­های کمتر بهتر بوده ولی با افزایش تعداد
قله­ها، کارآیی در بیشتر موارد کاهش می­یابد. با این وجود کارآیی الگوریتم پیشنهادی با افزایش تعداد قله­ها، از افت کمتری نسبت به اکثر الگوریتم­ها برخوردار است که دلیل این امر بهره­ گیری از مکانیزم فعال­سازی است. در الگوریتم­های دیگر، با بالا رفتن تعداد دسته­ها، تعداد ارزیابی شایستگی بیشتری انجام می­ شود، بنابراین به نوعی دسته­ها فرصت کمتری برای بهبود موقعیت خود دارند. این در حالی است که در الگوریتم پیشنهادی، هر چقدر هم که تعداد دسته­ها زیاد باشد (با توجه به زیاد بودن تعداد قله­ها)، از آن­جایی که تنها ۲ دسته­ی هم­گرا شده و یک دسته­­ی آزاد فعال هستند، فرصت مناسب در اختیار ۲ دسته­ی بهتر برای بهبود کارآیی الگوریتم و نیز فرصت بیشتری برای دسته­ی­­ آزاد جهت یافتن قله­های جدید وجود دارد.
نکته­ی قابل ذکر دیگری که در مورد نتایج وجود دارد این است که با افزایش تعداد قله­ها به ۱۰۰ و ۲۰۰، در برخی موارد کارآیی الگوریتم­ها بر خلاف تصور بهبود می­یابد. دلیل اتفاق افتادن این امر این است که فاصله­ی بین ارتفاع قله­ها در این شرایط کاهش یافته و بدین ترتیب میزان خطا نیز کاهش خواهد یافت.
از طرف دیگر در برخی موارد کیفیت نتایج خارج از انتظار به نظر می­رسد. به طور مثال با افزایش تعداد قله­ها از ۲۰ به ۳۰ کارآیی الگوریتم بهبود می­یابد. همچنین گاهی با افزایش فرکانس تغییرات، کارآیی الگوریتم بهبود (قابل توجه) پیدا نمی­کند. برای بدست آوردن دلیل این امر، آزمایشات بسیاری انجام شده که در آن­ها رفتار دسته­ها مورد بررسی کامل و دقیق قرار گرفته­اند. نتیجه ای که بدست آمد
بدین شرح است: با توجه به تصادفی بودن موقعیت قله­ها در هر بار اجرا، در برخی موارد این مسئله پیش می ­آید که بعضی از قله­ها (مخصوصا بهترین قله) در ابتدای اجرای الگوریتم بر روی مرزهای فضای جستجو قرار گرفته و همین امر موجب شده که این قله­ها دیرتر مورد شناسایی و نظارت توسط دسته­ها قرار گیرند. در نتیجه کارآیی الگوریتم در این موارد کاهش می­یابد. با توجه به این موضوع، مقدار متوسط بدست آمده در ۵۰ بار اجرای الگوریتم­ها می ­تواند دچار افزایش مقدار و در نتیجه کاهش کیفیت کارآیی گردد. بنابراین در صورتی­که این شرایط به طور تصادفی در ۵۰ بار اجرای یک الگوریتم بیشتر پیش بیاید، مقدار متوسط کارآیی آن دچار افت خواهد شد.
جدول ۵-۴ نیز به بررسی و مقایسه­ نتایج همانند جدول ۵-۳ می ­پردازد. با این تفاوت که در این­جا نتایج با فرکانس تغییرات استاندارد ۵۰۰۰ حاصل گردیده که در تعداد قله­های ۱، ۵، ۵۰، ۱۰۰ و ۲۰۰ کارآیی الگوریتم پیشنهادی بهتر از سایر الگوریتم­های مورد مقایسه­ می­باشد. در بقیه­ی قله­ها الگوریتم FTMPSO بهتر عمل کرده است.
جدول ۵-۴: مقایسه­ خطای برون­خطى (خطای استاندارد) الگوریتم­ها بر روی MPB با f=5000، S=1 و تعداد قله­های مختلف

مدیران باید کارکنان را از اهمیت انتخاب معیارها برای مبادله در همکاری بین سازمانی آگاه کنند.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

کارکنان باید برای دانش و مهارت­ های خاص در همکاری بین سازمانی آموزش داده شوند.
اطلاعات باید دقیق و زمان بندی شده و توانایی بازبینی و پردازش مفاهیم صریح و دقیق وجود داشته باشد.
استقبال مدیران از چالش­ها و تغییرات در سازمان
راهکارهایی به منظور بهبود توازن همگرایی و واگرایی در سازمان­ها:
مدیران باید تعادل لازم میان نظرات جدید را ایجاد کنند.
مدیران باید نظرات جدید و مشترکی را ایجاد کنند و به تعهدات خود در مقابل سایر سازمان­ها عمل کنند.
کارکنان باید زمان مناسب برای تصمیم ­گیری و ارائه خدمات را تشخیص دهند.
دیدگاه فردی کارکنان در سازمان مورد توجه قرار گیرد.
دیدگاه­ های مختلف مربوط به تصمیمات بین سازمانی قطعی شوند.
راهکارهایی به منظور بهبود فرایند منظم در سازمان­ها:
کارکنان باید تعهد دقیق نسبت به فعالیت­ها در سازمان داشته باشند.
کارکنان باید برای فرایندهای تصمیم ­گیری مهارت داشته باشند.
در سازمان باید درک صحیح از دستور و نظم وجود داشته باشد.
توسعه مهارت­ های کارکنان در راستای اهداف سازمانی
راهکارهایی به منظور بهبود همراستایی سیستم در سازمان­ها:
سیستم­های حمایتی سازمانی جهت ترویج مالکیت تنظیم شوند.
سازمان نسبت به اهداف کلی درک و تعهد ایجاد نماید.
اعضاء سازمان مطلع و متعهد باشند.
تضاد بین اعضاء سازمان و اهداف سازمان کاهش یابد.
همچنین با توجه به نتایج، راهکارهایی به منظور بهبود ابعاد فناوری اطلاعات و ارتباطات ارائه می­گردد:
راهکارهایی به منظور بهبود مدیریت در سازمان­ها:
سازمان باید برای به اشتراک گذاشتن داده ­ها، از ابزارهای مختلفی مانند: وب سایت، مرکز تماس و ….. استفاده کند.
داده­هایی که در یک بخش از سازمان به دست می­آیند، باید بلافاصله برای هر فردی در سازمان قابل استفاده باشند.
مدیران باید برنامه­ ریزی مربوط به سوانح و بهبودهای آن را تهیه کنند.
سازمان باید انواع مختلف داده ­ها (متن، صوت و..) را در بین واحدهای مختلف به اشتراک بگذارد.
ایجاد شرایطی جهت دسترسی کارکنان به اطلاعات مورد نیازشان
راهکارهایی به منظور بهبود اینترنت یا شبکه در سازمان­ها:
سازمان باید از طریق شبکه ­های فناوری اطلاعات بدون توجه به مکان فیزیکی، کنفرانس‌هائی داخلی را تشکیل دهد.
تمام واحدهای سازمان باید از طریق شبکه ­های فناوری اطلاعات به هم متصل باشند.
سرعت ارتباطات از طریق شبکه ­های فناوری اطلاعات، برای کاربران داخلی باید رضایت بخش باشد.
سازمان باید دارای بیشترین شبکه ­های فناوری اطلاعات باشد.
وجود سیستم­های کامپیوتری جهت جمع­آوری و ذخیره سازی اطلاعات
دسترسی کارکنان به شبکه اینترنت بصورت مطلوب

۵-۲-۴- ارائه راهکارهایی بهبود ارتباطات بین سازمانی با تمرکز بر فناوری اطلاعات و ارتباطات در دستگاه­های اجرایی شهرستان هندیجان

توانمندسازی مدیران برای تعامل و به اشتراک گذاری اطلاعات
راه اندازی سایت­های اختصاصی به منظور گسترش تعاملات سازمانی در فضای اینترنت
– استفاده هدفمند از اینترنت و تشویق و ترغیب کارشناسان و مدیران جهت گسترش کاربرد این ابزار تعاملی در درون سازمان­ها
– توسعه شبکه اینترنت و ارتباطات مجازی در سازمان­ها
– استفاده از ارتباطات شخصی مدیران در ایجاد و افزایش تعامل با سازمان­ها
– ایجاد فضای مشارکت در درون سازمان­ها، با اعتماد به کارکنان و تسهیل روابط فردی و سازمانی

۵-۳- نوآوری­های تحقیق

از جمله نوآوری­های این تحقیق می توان به مکان و حیطه­ی موضوعی آن اشاره کرد. چرا که تاکنون اکثر تحقیقات انجام شده در کشور به بررسی مبحث ارتباطات بین سازمانی در شرکت­های تجاری پرداخته­اند و کمتر به بررسی ارتباطات بین سازمانی در سازمان­های دولتی پرداخته شده است.

۵-۴- پیشنهادهایی برای سازمان­ها

با در نظر گرفتن این مسئله که ارتباطات بین سازمانی و فناوری اطلاعات در دستگاه­های اجرایی شهرستان هندیجان در سطح متوسط قرار دارد؛ مدیران بایستی برنامه­ ها و استراتژی­هایی لازم را جهت ایجاد و تقویت همکاری بین واحدها و سازمان­هایی مختلف مدنظر قرار دهند.
به مدیران سازمان­ها پیشنهاد می­گردد که با توجه به الگوی مفهومی ارائه شده در پژوهش حاضر، هر یک از آنها را به خوبی مورد توجه قرار دهند و با توجه به شرایط خاص سازمان خود آنها را بومی نموده و بکار گیرند.
به مدیران پیشنهاد می­ شود که ابتدا با توجه به اصول بیان شده، سازمان خود را کارشکافی کرده و با توجه به مشخصات مختصر بیان شده هر یک از اصول مذکور را در سازمان خود پیاده نموده تا بتوانند با همکاری و انسجام در سازمان عملکرد سازمانی خود را بهبود داده و به حداکثر بهره­وری در سازمان خود دست یابند.