• پارافیلم

• مگنت

• الکل اتانول ۷۰% (شرکت رازی ایران)

روش کار
جهت تهیه ۲۵۰ میلی لیتر محیط کشت

• g09/3 پودر DMEM در یک لیتر آب مقطر دیونیزه بوسیله همزن مغناطیسی حل و g025/0 استرپتومایسین و g025/0 پنی سیلین به آن اضافه شد.

• سپس g06/0 ال-گلوتامین به محلول فوق افزوده و پس از ۲۰ دقیقه g5/0 بیکربنات سدیم به آن افزوده شد.

• PH محیط با بهره گرفتن از محلول اسید کلریدریک ۱/۰ مولار به میزان ۲/۷ تنظیم شد.

• محیط فوق توسط دستگاه فیلتر در جریان هوا هود لامینار استریل گردید.

• مشخصات محیط کشت روی بطری نوشته و آن را در شرایط دمای C˚۴ و دور از نور نگه داشته شد.

• مراحل کنترل کیفی بر محیط کشت صورت گرفت.

۳-۲- طرز تهیه محیط کشت RPMI 1640
مواد و وسایل مورد نیاز

• هود لامینار (Beasat, Iran)

• پودر محیط کشت RPMI(Gibco, UK)

• بیکربنات سدیم (NaHCO3)

• پنی سیلین G (U/ml100) (شرکت جابربن حیان)

• استرپتومایسین (mg/ml1/0) (شرکت جابربن حیان)

• محلول اسید کلریدریک ۱/۰ مولار(HCL 0.1 molar)

• محلول هیدروکسید سدیم ۱/۰ مولار(NaOH 0.1 molar)

• آب مقطردیونیزه(شرکت QAL انگلستان)

• ترازو دیجیتال(Nikon, Japan)

• ارلن مایر ۱ لیتری

• استوانه مدرج ۵۰۰ میلی لیتری

• شیشه در پیچ دار جهت نگه داری محیط کشت در اندازه­ های ۲۵۰ و ۵۰۰ میلی لیتری استریل

• همزن مغناطیسی

• PH متر

• دستگاه فیلتر استریل (شامل: قیف، ارلن شیردار و کاغذ صافی) و پمپ خلا

• پمپ پریستالتیک حاوی آب مقطر

• فویل آلومینیومی

• پارافیلم

• مگنت

• الکل اتانول ۷۰% (شرکت رازی ایران)

روش کار
جهت تهیه ۲۵۰ میلی لیتر محیط کشت

• g09/3 پودر RPMI در یک لیتر آب مقطر دیونیزه بوسیله همزن مغناطیسی حل و g025/0 استرپتومایسین و g025/0 پنی سیلین به آن اضافه شد.

• پس از ۲۰ دقیقه g5/0 بیکربنات سدیم به آن افزوده شد.

• PH محیط با بهره گرفتن از محلول اسید کلریدریک ۱/۰ مولار به میزان ۲/۷ تنظیم شد.

• محیط فوق توسط دستگاه فیلتر در جریان هوا هود لامینار استریل شد.

• مشخصات محیط کشت روی بطری نوشته شده و در شرایط دمای C˚۴ و دور از نور نگه داشته شد.

• مراحل کنترل کیفی انجام گرفت.

۳-۳- تعیین زنده­مانی و شمارش سلول به روش تریپان بلو
اساس آزمایش
غشاء سلول­های مرده به رنگ­ها نفوذ پذیر است در حالی که در سلول­های زنده غشا سلولی به رنگ نفوذ ناپذیر است. تریپان بلو از جمله رنگ هایی است که برای تمایز سلول­های زنده از مرده توسط میکروسکوپ نوری بکار می­رود. سلول­های مرده در زیر میکروسکوپ آبی رنگ هستند و سلول­های سالم رنگ نمی­گیرند. درصد سلول­ها با بهره گرفتن از لام نئوبار محاسبه می­ شود .(Hashemi & Ghavami., 2007)

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

ساختن رنگ تریپان بلو